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目的:观察半夏秫米汤镇静催眠作用;探讨痰湿内阻慢性失眠模型的建立方法;观察对痰湿内阻慢性失眠模型大鼠HPA轴及5-HT信号通路的影响,探讨半夏秫米汤干预痰湿内阻慢性失眠的作用机制。
方法:1.半夏秫米汤镇静催眠作用的实验研究:40只昆明种小鼠随机分成空白组,半夏秫米汤低剂量组、中剂量组、高剂量组(原方剂量),地西泮组,每组8只。空白组按剂量0.1ml/10g灌胃给予生理盐水,其余各组按照人鼠剂量换算(根据60kg成人临床剂量生半夏15g、秫米30g,生半夏30g、秫米60g,生半夏60g、秫米120g,地西泮片5mg),半夏秫米汤低、中、高剂量组按照剂量6.75g/kg、13.5g/kg、27g/kg灌胃,地西泮组按剂量0.75mg/kg地西泮水溶液灌胃,每日1次,连续7d。末次灌胃给药后自主活动仪观察小鼠自主站立次数,协同阈下、阈上剂量戊巴比妥钠催眠实验观察小鼠入睡率、睡眠潜伏期及睡眠时间。
2.痰湿内阻慢性失眠模型的复制:32只Wistar大鼠随机分成痰湿证组、痰湿内阻慢性失眠组、单因素慢性失眠组、空白组,每组8只。痰湿证组:高脂饲料+猪油灌胃3ml/只/天10周;痰湿内阻慢性失眠组:高脂饲料+猪油灌胃3ml/只/天10周,并从第8周开始单平台水环境法进行睡眠剥夺20h/天(13:00-次日9:00)21天,17:00-次日7:00灯光照射连续21天;单因素慢性失眠组:普通饲料+等量生理盐水灌胃10周,并从第8周开始单平台水环境法进行睡眠剥夺20h/天(13:00-次日9:00)21天,17:00-次日7:00灯光照射连续21天;空白组:普通饲料+等量生理盐水灌胃10周。7周后全自动生化仪检测各组血清甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)的含量,以此作为痰湿证是否成功的标准。10周后,检测各组睡眠潜伏期、睡眠持续时间,以此作为慢性失眠模型是否成功的标准。
3.半夏秫米汤干预痰湿内阻慢性失眠大鼠的实验研究:48只Wistar大鼠随机分成空白组、痰湿内阻慢性失眠组、半夏秫米汤低剂量组、半夏秫米汤中剂量组、半夏秫米汤高剂量组(即原方剂量)、地西泮组、每组8只。造模方法同2。空白组、痰湿内阻慢性失眠组给予1ml/100g生理盐水灌胃,其余各组按照人鼠剂量换算(根据60kg成人临床剂量生半夏15g、秫米30g,生半夏30g、秫米60g,生半夏60g、秫米120g,地西泮片5mg),半夏秫米汤低剂量组、中剂量组、高剂量组按照剂量4.69g/kg、9.38g/kg、18.75g/kg半夏秫米汤灌胃,地西泮组按剂量0.75mg/kg地西泮水溶液灌胃,每日1次,连续14d。14天后采用WB法、PCR法、HPLC-ECD法、ELISA法检测HPA轴及5-HT信号通路的关键分子表达。
结果:1.半夏秫米汤镇静催眠作用的实验研究:与空白组相比,半夏秫米汤各剂量组小鼠自主站立次数减少(P<0.05),入睡率均升高,半夏秫米汤中、高剂量组睡眠时间延长,睡眠潜伏期缩短(P<0.01)。
2.痰湿内阻慢性失眠模型的复制:与空白组相比,7周后,痰湿证组、痰湿内阻慢性失眠组血清TG、TC、LDL-C升高,HDL-C降低,有统计学差异(P<0.05或P<0.01);10周后,痰湿内阻慢性失眠组、单因素慢性失眠组入睡率、睡眠潜伏期和睡眠持续时间存在显著性或极显著性差异(P<0.05或P<0.01),提示痰湿内阻慢性失眠大鼠模型复制成功。
3.基于HPA轴、5-HT信号通路半夏秫米汤干预痰湿内阻慢性失眠的实验研究:与痰湿内阻慢性失眠模型组相比,半夏秫米汤高剂量组大鼠升高中缝核5-HT1AR、5-HT2AR的蛋白表达,升高脑干5-HT、5-HIAA、5-HT1ARmRNA含量,降低脑干5-HT2ARmRNA含量,降低血清ACTH、CORT、CRH、GABA、NE、DA、下丘脑IL-1β、TNF-α含量,升高下丘脑IL-4、IL-10含量(P<0.05或P<0.01)。
结论:1.半夏秫米汤具有良好的镇静催眠作用,呈量效关系,以原方剂量(半夏60g,秫米120g)效果最佳。
2.单平台水环境法+高脂饲料复制痰湿内阻慢性失眠模型是可行的方法。
3.半夏秫米汤化痰通利,引阳入阴而安神可能是通过调控HPA轴、5-HT信号通路对痰湿内阻慢性失眠进行干预,并调控GABA、NE、DA、IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10表达。
方法:1.半夏秫米汤镇静催眠作用的实验研究:40只昆明种小鼠随机分成空白组,半夏秫米汤低剂量组、中剂量组、高剂量组(原方剂量),地西泮组,每组8只。空白组按剂量0.1ml/10g灌胃给予生理盐水,其余各组按照人鼠剂量换算(根据60kg成人临床剂量生半夏15g、秫米30g,生半夏30g、秫米60g,生半夏60g、秫米120g,地西泮片5mg),半夏秫米汤低、中、高剂量组按照剂量6.75g/kg、13.5g/kg、27g/kg灌胃,地西泮组按剂量0.75mg/kg地西泮水溶液灌胃,每日1次,连续7d。末次灌胃给药后自主活动仪观察小鼠自主站立次数,协同阈下、阈上剂量戊巴比妥钠催眠实验观察小鼠入睡率、睡眠潜伏期及睡眠时间。
2.痰湿内阻慢性失眠模型的复制:32只Wistar大鼠随机分成痰湿证组、痰湿内阻慢性失眠组、单因素慢性失眠组、空白组,每组8只。痰湿证组:高脂饲料+猪油灌胃3ml/只/天10周;痰湿内阻慢性失眠组:高脂饲料+猪油灌胃3ml/只/天10周,并从第8周开始单平台水环境法进行睡眠剥夺20h/天(13:00-次日9:00)21天,17:00-次日7:00灯光照射连续21天;单因素慢性失眠组:普通饲料+等量生理盐水灌胃10周,并从第8周开始单平台水环境法进行睡眠剥夺20h/天(13:00-次日9:00)21天,17:00-次日7:00灯光照射连续21天;空白组:普通饲料+等量生理盐水灌胃10周。7周后全自动生化仪检测各组血清甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)的含量,以此作为痰湿证是否成功的标准。10周后,检测各组睡眠潜伏期、睡眠持续时间,以此作为慢性失眠模型是否成功的标准。
3.半夏秫米汤干预痰湿内阻慢性失眠大鼠的实验研究:48只Wistar大鼠随机分成空白组、痰湿内阻慢性失眠组、半夏秫米汤低剂量组、半夏秫米汤中剂量组、半夏秫米汤高剂量组(即原方剂量)、地西泮组、每组8只。造模方法同2。空白组、痰湿内阻慢性失眠组给予1ml/100g生理盐水灌胃,其余各组按照人鼠剂量换算(根据60kg成人临床剂量生半夏15g、秫米30g,生半夏30g、秫米60g,生半夏60g、秫米120g,地西泮片5mg),半夏秫米汤低剂量组、中剂量组、高剂量组按照剂量4.69g/kg、9.38g/kg、18.75g/kg半夏秫米汤灌胃,地西泮组按剂量0.75mg/kg地西泮水溶液灌胃,每日1次,连续14d。14天后采用WB法、PCR法、HPLC-ECD法、ELISA法检测HPA轴及5-HT信号通路的关键分子表达。
结果:1.半夏秫米汤镇静催眠作用的实验研究:与空白组相比,半夏秫米汤各剂量组小鼠自主站立次数减少(P<0.05),入睡率均升高,半夏秫米汤中、高剂量组睡眠时间延长,睡眠潜伏期缩短(P<0.01)。
2.痰湿内阻慢性失眠模型的复制:与空白组相比,7周后,痰湿证组、痰湿内阻慢性失眠组血清TG、TC、LDL-C升高,HDL-C降低,有统计学差异(P<0.05或P<0.01);10周后,痰湿内阻慢性失眠组、单因素慢性失眠组入睡率、睡眠潜伏期和睡眠持续时间存在显著性或极显著性差异(P<0.05或P<0.01),提示痰湿内阻慢性失眠大鼠模型复制成功。
3.基于HPA轴、5-HT信号通路半夏秫米汤干预痰湿内阻慢性失眠的实验研究:与痰湿内阻慢性失眠模型组相比,半夏秫米汤高剂量组大鼠升高中缝核5-HT1AR、5-HT2AR的蛋白表达,升高脑干5-HT、5-HIAA、5-HT1ARmRNA含量,降低脑干5-HT2ARmRNA含量,降低血清ACTH、CORT、CRH、GABA、NE、DA、下丘脑IL-1β、TNF-α含量,升高下丘脑IL-4、IL-10含量(P<0.05或P<0.01)。
结论:1.半夏秫米汤具有良好的镇静催眠作用,呈量效关系,以原方剂量(半夏60g,秫米120g)效果最佳。
2.单平台水环境法+高脂饲料复制痰湿内阻慢性失眠模型是可行的方法。
3.半夏秫米汤化痰通利,引阳入阴而安神可能是通过调控HPA轴、5-HT信号通路对痰湿内阻慢性失眠进行干预,并调控GABA、NE、DA、IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10表达。