蛋白质组结构复杂、种类繁多、含量动态范围宽。发展蛋白质预分级手段,可以降低蛋白质样品的复杂性,对于发展高灵敏度和高分离效率的检测手段有重要意义。基于固定化pH梯度毛细管等电聚焦整体(M-IPG-CIEF)柱构建的新型的间隙式毛细管蛋白质等电聚焦预分级装置,可对蛋白质样品进行预分级,促进分离。为构建该预分级装置,首先采用“原位聚合-聚焦一步法”合成了固定化pH梯度毛细管等电聚焦整体(M-IPG-CIEF)柱。以标准蛋白的混合物为样品对该柱的分离能力、线性和影响线性因素进行探讨。当流速为10μL/min时,蛋白质出峰时间和其等电点(pI)间线性关系良好,R2>0.997。将具有不同pH梯度范围的M-IPG-CIEF柱通过聚四氟乙烯管串联,构建间隙式毛细管蛋白质等电聚焦预分级装置。以标准蛋白质混合物为样品对该预分级系统的原理、分离能力和线性进行阐述和验证。结果表明,该柱保留了原M-IPG柱的聚焦能力和分离能力,通过控制等电聚焦材料的pH范围使目标蛋白保留在分离腔内。采用该分级装置,进行高丰度蛋白质的去除和低丰度蛋白质的富集的研究。通过将高浓度蛋白聚焦于分离腔内去除了卵清蛋白,清除率达77%。利用该预分级装置富集牛奶蛋白中的低丰度组分(pI4.7-5.1),有效促进检测灵敏度。将该预分级装置与μ-RPLC(C8填充柱)和聚丙烯酰胺涂层毛细管(CZE)柱串联,构建了CIEF-μ-RPLC和CIEF-CZE系统,并用于牛奶及牛奶胰蛋白酶酶解产物的分离分析。部分在CIEF中不能分开的蛋白质或多肽在串联系统中达到基线分离,证实串联系统分离能力较高,峰容量较大。