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目的分离并培养C57BL/6J-TgN (chickenβ-actin-EGFP) ZLFILAS小鼠羊膜干细胞(amnion-derived stem cells, ADSCs),并探索其特性。ADSCs具有多潜能分化和自我更新的能力,并能分泌神经营养因子营养支持神经元存活。通过移植小鼠ADSCs至APPswe/PS1AE9 (PAP)双转基因模型小鼠海马内,检测PAP小鼠认知功能,明确小鼠ADSCs对PAP小鼠认知功能的影响并进行初步的机制探讨研究,为干细胞移植治疗探寻新的细胞来源,并对ADSCs治疗AD的基础研究和临床应用提供依据。方法无菌条件下机械分离C57BL/6J-TgN (chickenβ-actin-EGFP) ZLFILAS小鼠羊膜,并采用0.25%胰蛋白酶-EDTA的消化,应用高糖-DMEM培养基(添加10gg/L人表皮生长因子)培养。取2-4代小鼠ADSCs,免疫荧光方法检测干细胞表面标记物：性别决定区Y框蛋白(sex determining region Y box 2, SOX-2)、八聚体结合转录因子4 (octamer-binding transcription factor, OCT-4)、间充质干细胞标记物Vimentin,胚胎干细胞标记物阶段特异性胚胎表面标记物-3(stage specific embryonic antigen-3,SSEA-3)、阶段特异性胚胎表面标记物-4(stage specific embryonic antigen-4, SSEA-4)、神经干细胞标记物Nestin和星形胶质细胞标记物(glial fibrillary acidic protein, GFAP),还可表达脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor, BDNF)和神经生长因子(nerve growth factor, NGF);细胞流式术方法检测ADSCs表面表达间充质细胞标记物CD29、CD44、 CD105、CD73、CD45和CD11b。免疫印迹方法检测6月龄野生型C57BL/6J和PAP小鼠脑组织海马内BDNF蛋白表达水平。PCR方法鉴定APPswe/PS1ΔE9小鼠基因型。采用脑立体定位技术,移植ADSCs至6月龄PAP小鼠海马(PAP-ADSC)内,同时对照组注射同等剂量的PBS (PAP-PBS),野生型组注射相等剂量ADSCs (WT-ADSC)和PBS (WT-PBS)。细胞移植4周后,通过Morris水迷宫实验和旷场实验等行为学检测小鼠的空间学习记忆能力及自主活动情况。移植6周后,通过免疫印记方法检测BDNF.突触素(synaptophysin, Syn)、APP和P-Tau (Thr231)/Tau-5蛋白水平,ELISA检测脑组织海马内Aβ40和Aβ42含量。免疫荧光方法检测脑内星形胶质细胞标记物GFAP、小胶质细胞标记物离子型钙结合受体分子-1(ionized calcium binding adaptor molecle-1, Ibal)激活情况。硫黄素-S荧光染色和6E10染色观察脑内老年斑沉积情况。免疫组化检测小鼠脑内神经元标记物微管相关蛋白-2改变情况。结果分离培养2-4代小鼠ADSCs,经过细胞免疫荧光和细胞流式术方法鉴定,其中细胞免疫荧光结果显示,C57BL/6J-TgN (chickenβ-actin-EGFP) ZLFILAS小鼠羊膜细胞表达干细胞标记物SOX-2、OCT-4、间充质干细胞标记物Vimentin,胚胎干细胞标记物SSEA-3、SSEA-4、神经干细胞标记物Nestin和星形胶质细胞标记物GFAP,还可表达BDNF口NGF；应用流式细胞术鉴定细胞表面抗原,小鼠羊膜干细胞表达间充质细胞标记物CD29、CD44、CD105、CD73和CD45,其中CD29和CD44表达量在90%以上,少量表达CD11b。免疫印迹检测结果显示,与6月龄野生型C57BL/6J相比,同月龄PAP小鼠脑组织海马内BDNF水平明显减少。移植ADSCs至6月龄PAP小鼠海马内,移植2周后通过免疫荧光方法发现ADSCs在脑内可存活。细胞移植4周后,通过Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆能力,结果显示：在隐藏平台实验中,与PAP-PBS小鼠相比,PAP-ADSC小鼠寻找平台所用的潜伏期明显缩短；在空间探索实验中,PAP-ADSC小鼠穿过平台所在区域的次数明显增多；旷场实验中,PAP-ADSCs小鼠表现异常自主活动明显减少。细胞移植6周后,免疫印迹结果显示,与PAP-PBS小鼠相比,PAP-ADSCs小鼠海马内BDNF和Syn水平增加,而两组间APP和P-Tau(Thr231)/Tau-5水平没有明显变化。ELISA检测Aβ40、Aβ42没有明显差异。免疫荧光检测PAP-ADSC小鼠脑组织海马内星形胶质细胞和小胶质细胞激活减少。6E10染色和硫黄素-S荧光染色结果显示脑内老年斑沉积没有明显变化。免疫组化检测PAP-ADSCs与PAP-PBS小鼠脑内神经元标记物微管相关蛋白-2没有显著变化。结论ADSCs可表达神经干细胞、胚胎干细胞和间充质干细胞等干细胞标记物,具有干细胞特性,并能分泌神经营养因子。移植ADSCs至小鼠海马内改善APPswe/PS1ΔE9小鼠的空间学习记忆和自主活动能力,增加小鼠海马内BDNF和Syn蛋白水平,抑制星形胶质细胞和小胶质细胞激活。因此,移植ADSCs可改善AD模型小鼠行为学功能,并促进小鼠脑内BDNF和Syn水平增加,为干细胞相关基础研究和神经系统疾病的治疗提供了新的方法和线索。