土家药物岩泽兰对大鼠佐剂性关节炎的影响及机制研究

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目的:类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是以众多细胞因子参与、以侵蚀性滑膜为特征的全身性自身免疫性疾病。目前,其发病机制至今仍不明确,且具有疗效高、针对性强、可以根治RA药物制剂仍然空缺。本课题以弗氏完全佐剂所诱导的佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠模型为基础,观察岩泽兰乙醇和水提取物对AA大鼠足关节肿胀改善情况、通过对滑膜病理切片观察来评价其治疗RA的作用。通过检测AA大鼠血清中TNF-α、IL-17的分泌水平、关节滑膜MMP3、IL-17、IL-6、TNF-α的表达情况及IL-17、MMP3的基因表达影响,以期部分揭示其治疗大鼠佐剂性关节炎的初步机制,并初步评价其安全性。方法:1.建立AA大鼠关节炎模型。2.观察关节的肿胀、测定足趾周径变化。3.检测岩泽兰对模型大鼠滑膜组织的影响。4.ELISA法检测各组大鼠血清TNF-α、IL-17的分泌水平。5.免疫组织化学染色的方法检测关节滑膜组织中MMP3、IL-17、IL-6、TNF-α的表达水平。6荧光定量PCR检测大鼠血液中IL-17、MMP3的基因表达情况。7.通过小鼠急性毒性试验,初步评价其安全性。结果:1.成功建立AA大鼠关节炎模型。2.岩泽兰改善AA大鼠足关节肿胀,与模型组比较呈显著性差异(p<0.05);病理切片显示,与模型组相比炎症细胞分泌减少,细胞增生减少,血管增生不明显。3.岩泽兰能下调血清中的tnf-α、il-17的表达,与模型组比较有显著差异(p<0.05)。4.岩泽兰抑制滑膜中mmp3、il-17、il-6、tnf-α的表达,与模型组比较有显著差异(p<0.05)。5岩泽兰能下调aa大鼠mmp3、il-17的基因表达,与模型组比较有显著差异(p<0.05)。6.小鼠急性毒性试验表明,岩泽兰的水提和醇提液ld50为18.16g/kg和19.23g/kg,均相当于成人临床用量210倍以上。结论:1.岩泽兰对aa大鼠模型有治疗作用。2.岩泽兰通过抑制血清中tnf-α、il-17促炎因子的表达,减少炎性细胞的分泌,从而改善ra关节炎性症状,缓解关节肿胀,这可能是其发挥治疗的机制之一。3.岩泽兰通过抑制关节滑膜中mmp3、il-17、il-6、tnf-α细胞因子及炎症介质的表达、从而抑制炎症反应、减少了血管增生,这可能是其改善ra病情的机制之一。4.岩泽兰通过下调aa大鼠mmp3、il-17的基因表达,减少促进炎症的炎症介质及细胞因子的生成,从而抑制炎症反应,减缓关节软骨破坏,这可能是其发挥治疗的机制之一。5.急性毒性实验结果,其岩泽兰水提液和醇提液的ld50均为成人临床用药剂量的200倍以上,表明岩泽兰药液在人体运用是短期内是安全的。本实验结果提示岩泽兰具有治疗类风湿关节炎的作用,减少滑膜血管新生、抑制炎性因子分泌、减少了血管增生是其可能的作用机制。可作为进一步研究岩泽兰治疗ra的作用机制的研究基础。
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