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实蝇Fruit Flies,隶属于双翅目Diptera,实蝇科Tephritidae,全世界广泛分布,是多种热带、亚热带水果和蔬菜的重要害虫,以卵、幼虫或蛹随寄主果实、包装物或交通工具等进行远距离的人为传播。由于非成虫态实蝇难以进行形态学鉴定,其分子鉴定成为植物检疫以及生物入侵防控领域亟需开展的研究。本研究针对我国检疫性实蝇开展分子鉴定技术体系的研究。主要研究结果如下：(1)构建了我国检疫性实蝇DNA条形码库,其中收录来自亚洲、大洋洲、非洲、欧洲、北美洲和南美洲的实蝇DNA条形码序列共计6属181种2252条。以果实蝇属为例,对实蝇DNA条形码鉴定有效性进行分析,结果表明DNA条形码可实现除复合体以外的实蝇物种的准确鉴定。(2)基于DNA条形码序列,设计并筛选出27种我国主要检疫性实蝇(墨西哥按实蝇Anastrepha ludens.西印度按实蝇A.obliqua.蒲桃果实蝇Bactrocera albistrigata、番石榴果实蝇B.correcta、杨桃果实蝇B.carambolae、橘小实蝇B.dorsalis、辣椒果实蝇B.latifrons、锈红果实蝇B.rubigina、昆士兰果实蝇B.tryoni、短尾果实蝇B.tuerculata、面包果实蝇B.umbrosa、桃果实蝇B.zonata、油橄榄果实蝇B.oleae、橘大实蝇B.minax、蜜柑大实蝇B.tsuneonis、葫瓜实蝇B.bezziana、两带果实蝇B.cilifera、瓜实蝇B.cucurbitae、宽带果实蝇B.scutellata、南亚果实蝇B.tau、枣实蝇Carpomya vesuviana.地中海实蝇Ceratitis capita、芒果小条实蝇C.cosyra、纳塔耳小条实蝇C.rosa、葫芦寡鬃实蝇Dacus bittatus、樱桃绕实蝇Rhagoletis cerasi和苹绕实蝇R.pomonella)种特异性引物,建立了我国检疫性实蝇常规PCR鉴定技术方法。(3)基于DNA条形码序列,设计并筛选出27种我国主要检疫性实蝇种特异性TaqMan-MGB探针,并结合已筛选出的种特异性引物,建立了我国检疫性实蝇实时荧光PCR鉴定技术方法。(4)首次应用集成流路芯片技术,在所筛选出的种特异性引物和探针的基础上,建立了我国检疫性实蝇集成流路芯片鉴定技术方法。(5)应用四种分子鉴定技术,分别对来自国内外的非成虫态实蝇进行种类鉴定,结果为番石榴果实蝇、芒果小条实蝇、南亚果实蝇、橘大实蝇和辣椒果实蝇。(6)建立了基于DNA条形码技术、常规PCR技术、实时荧光PCR技术和集成流路芯片技术的我国检疫性实蝇分子鉴定技术体系。本研究为我国检疫性实蝇的快速准确鉴定提供了技术支持,对植物检疫、生物入侵防控等具有重要的实践意义。