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凡纳滨对虾是世界上养殖面积最大和产量最高的对虾品种。亲虾饵料与营养对凡纳滨对虾的繁殖性能至关重要,其相关的研究国内外鲜少报道。 本实验利用不同催熟饲料进行凡纳滨对虾催熟实验,分别取成熟度不同的对虾的肝胰腺组织,进行HE染色和免疫组织化学染色,对比对虾肝胰腺组织在性成熟过程中的变化。同时,取不同成熟时期的对虾的血液,抽取血清,测其雌激素和孕激素的含量变化,比较不同时期对虾激素含量的变化。实验结果显示,对虾性腺发育比较好的,其肝胰腺组织相对比较小,有的肝胰腺组织由于过度B细胞数量减少,转运泡数量增多,细胞质内出现许多空泡,肝小管的管腔出现脱落的内容物;在催熟阶段,血液中的雌激素先不断增加,在性腺相对成熟时,雌激素有所下降,在成熟期时血淋巴中的孕酮含量急剧增加,达到最高为990.2±102.5pg/ml。 本实验还测定繁殖性能相关参数,并通过荧光定量PCR技术对各亲虾肝胰腺和卵巢中VTG的表达水平的变化进行了追踪研究。结果显示,水丝蚓组的性腺增重最高,达1475%,连续产卵率最大,平均为72.08%,与传统沙蚕组合饵料组无显著差异性(P>0.05)。凡纳滨对虾肝胰腺和卵巢组织中均存在VTGmRNA,在肝胰腺和卵巢中均呈先上升后下降的表达模式;VTG mRNA的表达量能够一定程度上反映对虾的繁殖性能,有希望发展成为亲虾繁殖性能选育指标;水丝蚓在促进亲虾性腺发育方面效果较传统沙蚕饵料组合好,在改善亲虾产卵效果方面基本与沙蚕组合相当,可作为沙蚕替代饵料用于凡纳滨对虾的亲虾强化培育和催熟。 本实验还构建了凡纳滨对虾头部组织全长cDNA文库,电子克隆了凡纳滨对虾肌钙蛋白C基因全长cDNA并对其序列进行了分析。分析发现凡纳滨对虾中存在表达同一类蛋白质—肌钙蛋白C的2种不同的核苷酸序列(称之为TPNC1和2),其CDS间的同源性仅达到73.5%。生物信息学分析表明该基因可能参与对虾肌肉收缩。半定量RT-PCR在不同组织的表达分析表明,该基因在正常对虾和抗对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)感染的对虾的眼柄、肌肉和鳃组织中表达较高,在心脏、肠和胃组织中表达较低,在肝胰腺中不表达,说明该基因在部分组织中的表达受病毒感染的影响,肌钙蛋白C基因的差异表达是否是IHHNV造成对虾生长缓慢的主要原因还有待于进一步研究。