小麦avenin-likeb转基因纯合株系的筛选鉴定

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小麦Avenin-like b蛋白是一类新型种子储藏蛋白,含有18或19个半胱氨酸残基(Cys),预测可以形成分子间二硫键,进而影响小麦面粉的加工品质,但目前该功能预测尚未经研究证实。本研究在获得转avenin-like b基因单株的基础上,分别在基因和蛋白质水平上对转基因植株及其后代进行筛选鉴定。利用PCR技术筛选阳性转基因植株;运用Southern blot技术检测小麦转基因植株中的外源avenin-like基因的拷贝数;通过SDS-PAGE和Western blot技术检测外源目的基因是否在小麦胚乳中稳定地表达。经过连续5代转基因小麦株系的筛选,获得了能够稳定表达Avenin-like b蛋白的转基因纯合株系,此外,对小麦Avenin-like b蛋白的存在形式等进行了分析。本研究取得的主要研究结果如下:(1)优化了利用小麦Avenin-like b蛋白多克隆抗体对小麦中外源Avenin-like b表达蛋白的检测条件,为利用Western blot方法分析转基因植株中Avenin-like b蛋白的表达水平奠定了基础;(2)经过连续五代(T0-T4)的筛选,分别获得了3个以郑麦9023、2个以鄂麦12为受体的小麦转基因纯合株系;(3)与对照株系相比,转基因小麦面粉的面筋指数和SDS沉降值体积都得到了显著性地改善,证实了过表达小麦Avenin-like b蛋白对面粉的加工品质具有正向效应;(4)SDS-PAGE和Western blot分析表明,小麦Avenin-like b蛋白在小麦种子中主要以寡聚体和聚合体蛋白的形式存在,少部分以单体的形式存在。在转基因株系中,聚合体蛋白中的Avenin-like b蛋白的含量显著增加。
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