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1背景和目的：1，2，3-三氮唑在药物化学合成中占据重要地位，它具有易于合成以及生物活性较高等特点。近年研究表明，1，2，3-三氮唑类化合物具有较强的抗肿瘤活性，使此类化合物的研究成为研发抗肿瘤药物的一个热点。DYC-279是一种新合成的小分子化合物，具有1，2，3-三氮唑基团的二硫代氨基乙酸酯，相对分子质量为468，对MGC-803、MCF-7、PC-3和EC-109等细胞株具有较强的抑制作用，是一种具有活性的药物前体，但其作用机制尚没有明确的报道。本文研究了DYC-279对人肝癌细胞HepG-2的体外抗肿瘤活性，运用Western blot及PCR方法探讨其干扰细胞周期及诱导凋亡作用的机制，并初步考察了DYC-279对CYP450酶活性的影响。2方法：分别用0.39、0.78、1.56、3.13、6.25、12.5mg/L的DYC-279处理人肝癌HepG-2细胞24、48及72h后，CCK-8法检测DYC-279对细胞的增殖抑制作用；用浓度为0.78、1.56、3.13mg/L的DYC-279处理人肝癌HepG-2细胞24h后，FCM检测细胞周期变化和凋亡情况；使用RT-PCR及Western blot技术检测细胞周期及凋亡相关因子CyclinB1、cdc-2、CyclinD1、Caspase9、Bax及Bcl-2的mRNA或蛋白表达水平变化；使用大鼠S9体外孵育体系，分析DYC-279对CYP1A2、CYP2D6、CYP2E1三种代谢酶活性的影响。3结果：(1)DYC-279对细胞株HepG-2的抑制实验CCK-8法检测结果表明DYC-279对细胞的抑制作用随药物浓度的增大而增大，随药物作用时间的延长而增加；DYC-279处理细胞24h、48h及72h后，DYC-279对人肝癌细胞株HepG-2的IC50值分别为（10.6±2.7）mg/L、（6.5±1.9）mg/L、（3.1±1.1）mg/L。(2)DYC-279对HepG-2细胞周期及凋亡的干扰作用FCM检测细胞周期变化显示，随着药物浓度的增加，处于G0/G1期的细胞数目减少，G2/M期的明显增加，而S期细胞数目变化不明显。使用AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡显示，药物作用24h后，细胞早期凋亡及晚期凋亡数目有增加的趋势，且早期凋亡更加明显。(3)PCR技术检测周期相关基因表达的变化PCR检测CyclinB1、cdc-2、CyclinD1基因的mRNA水平结果显示，CyclinB1、cdc-2基因的mRNA表达水平均上调，CyclinD1基因的mRNA水平显著下调，预示着细胞周期相关基因CyclinB1、cdc-2、CyclinD1的表达受到DYC-279的影响。(4)DYC-279对细胞周期及凋亡相关蛋白表达的影响实验采用Western blot方法检测周期蛋白CyclinB1、cdc-2、CyclinD1及凋亡蛋白Caspase9、Bcl-2、Bax的表达水平。实验表明蛋白CyclinB1、cdc-2、Caspase9、Bax等的表达水平随用药浓度的增加而上调，蛋白CyclinD1与Bcl-2的表达水平明显下调。（5）DYC-279对CYP450酶活性的影响不同浓度DYC-279与S9孵育体系中，与对照组相比，非那西丁的浓度变化不明显，表明DYC-279对CYP1A2酶活性无影响；右美沙芬的代谢减慢，说明了DYC-279降低了CYP2D6的活性；氯唑沙宗的代谢减慢较快，说明了DYC-279同样降低了CYP2E1的活性，同时孵育体系中DYC-279的浓度越高，氯唑沙宗的代谢越慢，预示着DYC-279对CYP2E1活性的影响可能具有浓度依赖性。结论：（1）DYC-279在一定浓度下抑制人肝癌HepG-2细胞株的增殖。（2）DYC-279阻滞HepG-2细胞于G2/M期并诱导其凋亡现象的产生。（3）DYC-279的抗肿瘤活性可能与CyclinB1、cdc-2、CyclinD1、Caspase9、Bcl-2、Bax等蛋白表达异常相关。（4）DYC-279可以抑制代谢酶CYP2D6及CYP2E1的活性而对CYP1A2的活性影响不大。