用野油菜黄单胞菌插入突变体库筛选与胞外蛋白酶产生相关的基因

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用转座子Tn5gusA5诱变野油黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv. Campestris以下简称Xcc),构建了Xcc8004Tn5gusA5插入突变体库.获得Tn5gusA5插入突变体17820个,从中筛选胞外蛋白酶突变体.经含1﹪牛乳的NYGA平板检测,获得水解圈明显减小的突变体53个.运用TAIL-PCR和测序的方法定位了转座子Tn5gusA5的插入位置,经分析共插入14个ORF中.ORF注释表明,共中一个基因为胞外蛋白酶结构基因,3个基因与合成调控有关,5个转运分泌有关,2个与LPS合成有关,其余3个ORF的注释功能与胞外蛋白酶的关系未见报道,为研究这3个ORF与胞外蛋白酶产生的关系,采用同源双交换ORF缺失法进行了进一步验证,成功地构建了xcc-4463缺失突变体,所得缺失突变体经检测胞外蛋白酶减少,在寄主上致病性降低.
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