甘蔗内生固氮菌的分离鉴定及16SrRNA基因克隆和序列分析

来源 :福建师范大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:zuiaiyunhao
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本文首先用无氮培养基从福州甘蔗栽培品种的根部进行内生固氮菌的分离、纯化和筛选,并采用乙炔还原法对这些菌株进行固氮酶活性测定;其次对分离出的菌株进行生理生化指标测定和16S rRNA基因克隆和序列分析;同时研究了在不同环境因子作用下少动鞘氨醇单胞菌的生长特性;最后,采用三亲交配法将nifH-gfp融合荧光蛋白标记基因导入固氮菌少动鞘氨醇单胞菌,将其回接到甘蔗中,利用激光共聚焦扫描显微镜对其进行了观察。研究结果表明:实验分离到了12株形态大小、质地各异的菌株;固氮酶活性测定结果显示6株固氮酶活性较高,其中少动鞘氨醇单胞菌固氮酶活性为最高;在对12株菌16S rRNA基因的序列分析的基础上,建立了系统发育树,确定了菌株分类学地位及进化亲缘关系;在不同环境因子作用下,少动鞘氨醇单胞菌在生长时对这些处理有较广的适应性,对温度和pH的适应范围较大,在15-40℃,pH4.5-9.0范围内均能生长,并且具有很强的耐铵能力,而且对高渗透压环境也有很强的适应性;显微观察表明固氮菌主要定殖在甘蔗根的内皮层细胞,回接结果显示接种少动鞘氨醇单胞菌的甘蔗苗与未接菌的对照相比,株高提高了87.19%,鲜重增加了119.88%。
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