微生物利用混合糖发酵中存在着分解代谢阻遏效应,该现象大大降低了发酵效率。为了解决这些问题,通过RED基因敲除手段构建两株产D-乳酸发酵的大肠杆菌工程菌,木糖缺陷型E.coli JH1303及葡萄糖和木糖混合糖共发酵菌株E.coli JH27,解决木质纤维素作为碳源利用不彻底的问题:（1）以E.coli JH13（E.coli B△frd BC,△ack A,△foc A-pfl B,pfl Bp6-ace EF-lpd,△mgs,△rng HSR2,△adh E,ldh A）为出发菌株,依次敲除木糖ATP依赖型的转运基因xyl FGH,木糖质子依赖型的转运基因xyl E,木糖异构酶基因xyl A,获得一株不能利用木糖的菌株E.coli JH1303。初步探索菌株E.coli JH1303单糖和混合糖发酵情况,E.coli JH1303相比于E.coli JH13,在6%葡萄糖单糖发酵中,葡萄糖消耗速率几乎没有变化。在6%木糖单糖发酵中,木糖消耗速率从0.626 g（L·h）^-1降低到0g（L·h）^-1。即xyl FGH、xyl E、xyl A三基因敲除对葡萄糖单糖消耗无影响,对木糖消耗速率降低有叠加作用。xyl FGH、xyl E、xyl A三基因的敲除完全阻断了菌株对木糖的利用。在3%葡萄糖和3%木糖混合糖中,葡萄糖消耗速率从1.695 g（L·h）^-1提高到2.278 g（L·h）^-1,糖酸转化率从79.37%提高到87.3%。E.coli JH1303作为只能利用葡萄糖的菌株,与仅利用木糖的菌株进行混合发酵培养,在葡萄糖和木糖混合糖条件下能避免葡萄糖效应,从而提高发酵生产效率。（2）为了消除葡萄糖效应,在E.coli JH18（E.coli JH13△pts G△mgl B）的基础上敲除了半乳糖转运蛋白基因（gal P）、葡萄糖激酶基因（gl K）、甘露糖转运基因（man XYZ）和乙酰氨基葡萄糖转运基因（nag ABC）,构建了葡萄糖和木糖混合糖共发酵菌株E.coli JH27。初步探索菌株E.coli JH27单糖和混合糖发酵情况,E.coli JH27相比于E.coli JH13,在以6%葡萄糖为碳源进行发酵时,葡萄糖消耗速率从4.05 g（L·h）^-1降低至2.275 g（L·h）^-1;在以6%木糖为碳源进行发酵时,木糖消耗速率从0.64 g（L·h）^-1增加至0.8 g（L·h）^-1;即gal P、gl K、man XYZ和nag ABC四基因的敲除降低了葡萄糖消耗速率并升高了木糖的消耗速率。在3%葡萄糖和3%木糖混合糖中,E.coli JH27乳酸的生成强度从0.73 g（L·h）^-1提高到1.0g（L·h）^-1,糖酸转化率从84.5 g（L·h）^-1提高到86.1 g（L·h）^-1,发酵周期也从72 h缩短到54 h。E.coli JH27的碳代谢阻遏效应明显减弱,乳酸生产强度和糖酸转化率均增加,能够高效的利用混合糖发酵生产D-乳酸,提高发酵生产效率。