体外冲击波治疗通过对HIF-1α、NLRP3表达的调控减轻大鼠膝关节伸直固定诱导的肌源性挛缩

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目的本研究旨在通过使用体外冲击波进行干预治疗,探讨体外冲击波对大鼠肌源性挛缩的治疗作用及其可能机制,为临床治疗提供理论依据。方法本研究将32只Sprague Daweley雄性大鼠随机分成以下4组,每组8只。对照组(C组,不做固定),自由活动4周。固定2周组(I组),用支具将大鼠左膝关节伸直位固定2w。自然恢复组(R组),将大鼠左膝关节伸直位固定2周后自由活动2周。冲击波治疗组(E组),将大鼠左膝关节伸直位固定2周后给予体外冲击波治疗2周。然后处死各组大鼠,将大鼠左髋关节离断,使用关节活动度测量仪测量各组大鼠左膝关节活动度(range of motion,ROM)。使用苏木精伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)测量股直肌横截面积(cross sectional area,CSA)、Masson染色检测股直肌胶原沉积,WB检测股直肌中缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、NOD样受体蛋白3(NOD-like re ceptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2/3的蛋白表达水平,评估体外冲击波疗法(extracorporeal shock wave therapy,ESWT)对大鼠固定诱导的膝关节伸直型肌挛缩的治疗作用及其可能机制。结果(1)与C组相比,I组大鼠总挛缩和肌源性挛缩程度增高明显(P<0.05)。HE染色显示,I组大鼠平均肌纤维横截面积较C组减小(P<0.05)。Masson染色显示I组股直肌胶原沉积较C组明显增多(P<0.05)。WB结果显示,与C组相比,I组HIF-1α、NLRP3、TGF-β1、Smad2/3的蛋白表达明显增高(P<0.05)。(2)与I组相比,R组大鼠总挛缩和肌源性挛缩程度减轻(P<0.05)。HE染色显示,R组大鼠平均肌纤维横截面积较I组增大(P<0.05)。Masson染色显示R组股直肌胶原沉积较I组减少(P<0.05)。WB结果显示,与I组相比,R组HIF-1α、NLR P3、TGF-β1、Smad2/3的蛋白表达均降低(P<0.05)。(3)与R组相比,E组的大鼠在总挛缩和肌源性挛缩方面明显改善(P<0.05)。HE染色显示,E组大鼠平均肌纤维横截面积较R组增大(P<0.05)。Masson染色显示E组股直肌胶原沉积较R组减少(P<0.05)。WB结果显示,与R组相比,E组HIF-1α、NLRP3、TG F-β1、Smad2/3的蛋白表达降低(P<0.05)。(4)R组大鼠总挛缩和肌源性挛缩程度较C组增高(P<0.05),肌纤维横截面积较C组减小(P<0.05),股直肌胶原沉积增多(P<0.05),E组大鼠总挛缩和肌源性挛缩程度较C组增高(P<0.05),肌纤维横截面积较C组减小(P<0.05),股直肌胶原沉积增多(P<0.05);与C组相比,R组、E组HIF-1α、NLRP3、TGF-β1、Smad2/3的蛋白表达均增高(P<0.05)。结论(1)通过对大鼠的膝关节进行2周的伸直型外固定,成功建立了大鼠伸直型挛缩模型,我们发现固定能够诱导大鼠骨骼肌纤维化和肌萎缩,可能与HIF-1α、NLRP3、TGF-β1、Smad2/3的蛋白表达水平有关。(2)在体外冲击波治疗期间,与自然恢复组相比,大鼠左膝关节活动度、骨骼肌纤维化和肌肉萎缩有所改善。体外冲击波通过抑制HIF-1α、NLRP3的表达减轻大鼠固定诱导的肌源性挛缩,从而改善膝关节功能。
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