光谱法研究对硝基苯酚、苏丹红Ⅲ与牛血清白蛋白的相互作用

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血清白蛋白是生命的基石,是血浆含量中最为丰富的蛋白质,它可以结合外源性和内源性的小分子物质,并以蛋白质为载体,在体内存储、运输和代谢。对于血清白蛋白与药物小分子、有机小分子等物质相互结合的深入研究,可以系统地了解药物等物质的结构、生物化学、临床医学和动力学等丰富信息,有助于了解药物等小分子物质在人体内的吸收、分布与排泄,为药物药理和毒性研究提供了重要的参考价值,并且对进一步了解蛋白质载体的结构、开发新药都具有重要的指导意义。实验中采用了几种光谱技术手段,分别研究了两种小分子物质(对硝基苯酚、苏丹红Ⅲ)与牛血清白蛋白的相互作用机理,同时还研究了作用区域、结合位点数和作用力类型等。主要研究结果如下:1)采用荧光光谱、紫外-可见吸收光谱、圆二色谱以及三维荧光光谱、红外光谱技术手段,在模拟生理条件下,研究了对硝基苯酚(PNP)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用过程。结果表明,对硝基苯酚对BSA的内源性荧光具有猝灭作用,属于静态猝灭。实验分别求得了在291,299和307K三种不同温度下的对硝基苯酚与BSA结合的表观结合常数,结果分别为3.310×104、2.375×104、2.153×104L·mol-1,结合位点数都约为1。根据Van’t Hoff方程求得对硝基苯酚与BSA作用的熵变、焓变以及自由能变,由结果可知该体系是熵减少、自由能降低的自发过程,分子间主要以氢键和范德华力为主,并存在弱的静电作用。基于F rster’s理论,计算求得结合距离为1.58nm。竞争实验表明,对硝基苯酚结合在蛋白质的Site I位点上。圆二色谱、液体红外光谱和三维荧光光谱结果表明,对硝基苯酚导致了BSA分子的构象变化。2)采用荧光光谱、紫外-可见吸收光谱、圆二色谱以及三维荧光光谱、红外光谱技术手段,在模拟生理条件下,研究了苏丹红Ⅲ(SDⅢ)与牛血清白蛋白(BSA)的结合特征。结果表明,苏丹红Ⅲ对BSA的内源性荧光具有猝灭作用,猝灭规律不明显,主要为静态猝灭,同时伴有动态猝灭。实验过程中分别求得了在291,299和307K三种温度下的苏丹红Ⅲ与BSA结合的表观结合常数,分别为5.650×103、2.240×105、5.380×105L·mol-1,结合位点数都约为1。根据Van’t Hoff方程求得苏丹红Ⅲ与BSA作用的熵变、焓变以及自由能变,由结果可知该体系是熵增加、自由能降低的自发过程,分子间主要以疏水作用力为主,并存在弱的静电作用力。基于F rster’s理论,可知两者的结合距离为1.50nm。竞争实验表明,苏丹红Ⅲ结合在蛋白质的Site I位点上。圆二色谱、液体红外光谱和三维荧光光谱表明,苏丹红Ⅲ诱导了BSA分子的二级结构发生了变化,构象发生改变。
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