副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一种广泛分布于自然界、属于弧菌属的食源性致病菌。食用被副溶血弧菌污染的食物后,会引起多种肠胃炎症状（如腹痛、腹泻、恶心、呕吐、发热等）;重症患者还可能出现脱水、休克昏迷,甚至死亡,故副溶血弧菌又被称为“肠炎”弧菌。该菌在26℃下可快速增殖,24 h内增长为原污染量的50⁷90倍,可快速造成食品污染。目前,副溶血弧菌已成为我国首要食源性致病菌,尤其在一些沿海城市,由其引起的食物中毒案例占细菌性食物中毒总数的60%以上。而副溶血弧菌的传统检测方法操作繁琐、耗时较长、工作量巨大,因此,建立简便、快捷、灵敏的检测方法对于食品安全监测具有重要意义。目前,交叉引物扩增技术（cross-primer amplification,CPA）主要结合纳米金试纸条对靶标进行检测,由CPA技术衍生的其他检测方法仍十分少,远不如LAMP技术的开发。因此,为了CPA技术的进一步开发应用,本研究基于CPA技术建立了两种新的副溶血弧菌检测方法——实时荧光定量单交叉引物扩增（Real-time fluorescence quantitative single cross-priming amplification,RT-qsCPA）方法与交叉引物扩增-磷酸根(Cross-priming amplification-HPO₄²⁺,CPAP)可视化检测方法。本研究以副溶血弧菌tlh基因为靶基因设计CPA引物（正反向外引物4s和5a,交叉引物CP,内引物2a和3a）;优化RT-qsCPA方法与CPAP可视化检测方法的组成及反应条件;考察两种方法的灵敏度及特异性;比较不同纳米粒子对CPA扩增效率的影响,确定合适的纳米粒子以提高反应效率;比较CPAP可视化检测方法与磷酸根试纸条检测方法的检测效果。试验结果表明:1.RT-qsCPA最佳反应体系为0.5×SYBR GreenⅠ、1×等温扩增缓冲液、0.5 mol·L^-1甜菜碱、6 mmol·L^-11 MgSO₄、0.8 mmol·L^-11 dNTPs、0.5μmol·L^-11 CP、0.4μmol·L^-11 2a、0.4μmol·L^-13a、0.05μmol·L^-11 4s、0.05μmol·L^-11 5a、8 U Bst 2.0 DNA聚合酶、0.2 mg·mL^-11 SiO₂（50 nm粒径）;最佳反应温度为63℃;最佳反应时间为1h。2.CPAP最佳反应体系为1×等温扩增缓冲液、0.5 mol·L^-1甜菜碱、4 mmol·L^-11 MgSO₄、0.6 mmol·L^-11 dNTPs、0.5μmol·L^-11 CP、0.4μmol·L^-11 2a、0.4μmol·L^-11 3a、0.05μmol·L^-11 4s、0.05μmol·L^-11 5a、8 U Bst 2.0 DNA聚合酶、0.05 U热稳定无机焦磷酸酶（PPase）;CPAP最佳显色试剂组成为1.68 mmol·L^-1钼酸铵、0.08 mmol·L^-1酒石酸锑钾、0.3 mol·L^-11 H₂SO₄、0.8%抗坏血酸;最佳反应温度为63℃;CPAP最反应时间为35 min。3.0.2 mg·mL^-11 SiO₂对RT-qsCPA扩增效率具有明显的提高作用。4.RT-qsCPA及CPAP可视化检测方法的检测限均为10³copies。5.与使用磷酸根试纸条相比,CPAP可视化检测方法对CPAP产物中的磷酸根检测具有更好检测效果。通过本研究,建立了简易、快速、灵敏的基于CPA技术的定量及可视化新方法,为快速检测食品中副溶血弧菌提供了新的检测技术平台。