肿瘤的转移具有器官选择性,胃癌发生肝脏转移也是器官选择性的结果,目前关于器官选择性转移机制的研究,多数都集中于乳腺癌、前列腺癌、结肠癌等,对于胃癌肝脏选择性转移的研究不多。本课题组成员依据肿瘤的器官选择性转移原理为寻找阻断胃癌肝转移的多肽分子作出新的尝试。在前期工作中我们根据肿瘤细胞表型差异性原理,建立了胃癌肝高转移潜能细胞系XGC9811-L,以此细胞为靶标,以自发性多脏器转移细胞XGC9811为阴性筛选细胞,利用噬菌体随机肽库筛选技术得到了8个可与XGC9811-L细胞结合的噬菌体阳性克隆,这些阳性克隆是否具有细胞特异性,是否可影响靶细胞的生物学功能,从中能否找到可阻断胃癌肝转移的特异性结合多肽,本文对此进行了进一步的研究。目的本研究的目的是对可与胃癌肝高转移潜能细胞XGC9811-L结合的8个噬菌体阳性克隆进行结合效率和细胞特异性鉴定,从中挑选出特异性结合肽,进而研究此多肽对XGC9811-L细胞生物学行为的影响,试图找到抗胃癌肝转移的特异性结合肽,为阻断胃癌的肝脏选择性转移提供新的途径。方法(1)竞争结合实验:检测8个可与胃癌肝高转移潜能细胞结合的噬菌体阳性克隆的结合效率,从中挑选出结合效率高的克隆;(2)细胞结合ELISA实验和细胞免疫荧光技术检测结合效率高的噬菌体克隆是否具有细胞特异性;观察特异性结合噬菌体克隆的定位,是否可内化入细胞;(3)竞争抑制实验观察特异性结合的噬菌体与细胞的结合是否是通过其外源呈现肽起作用;(4)组织免疫化学:检测特异性结合肽是否可与发生了肝转移的人胃癌组织结合;(5)Western blot实验:检测胃癌肝高转移潜能细胞是否存在与筛选肽相结合的细胞蛋白;(6)通过体外转移相关实验:细胞生长曲线、侵袭实验、运动实验、细胞迁移实验、黏附实验来鉴定特异性结合肽是否可影响胃癌肝高转移潜能细胞的生物学行为;(7)裸鼠体内移植瘤实验:通过观察肝转移发生率和转移