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研究目的胰岛素抵抗是围术期常见的一种并发症,临床研究表明右美托咪定可以稳定围术期血糖并降低胰岛素抵抗的发生率,然而其分子机制尚未完全明确。内质网应激是胰岛素抵抗发生的重要机制之一,因此,本实验将研究右美托咪定对肝细胞胰岛素抵抗的影响,并探讨该影响是否通过降低内质网应激而实现。研究方法本实验选用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞和LO2细胞建立肝细胞胰岛素抵抗模型。HepG2细胞和LO2细胞分别用含不同浓度胰岛素的培养液培养不同时间,应用CCK8及葡萄糖浓度测定试剂盒选定制备模型的最佳胰岛素浓度及作用时间,即既不抑制细胞活性,又可以产生最大胰岛素抵抗效应。已成功诱导胰岛素抵抗的肝细胞用含不同浓度右美托咪定的培养液培养24小时,用葡萄糖检测试剂盒检测上清中的葡萄糖浓度,观察右美托咪定对胰岛素抵抗的影响。我们在m RNA水平和蛋白水平检测内质网应激相关蛋白结合免疫球蛋白(binding immunoglobulin protein,BIP)及内质网应激蛋白29(endoplasmic reticulum protein 29,ERp29),此外,用蛋白免疫印迹的方法检测胰岛素作用通路中的重要蛋白:蛋白激酶-B(protein kinase B,Akt)、磷酸烯醇式丙酮酸(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)及葡糖糖-6-磷酸酶(glucose 6 phosphatase,G6Pase)。研究结果HepG2细胞和LO2细胞在用含有10μg/ml胰岛素的培养液培养48 h后,葡萄糖消耗量出现了显著性降低,即产生了胰岛素抵抗。胰岛素抵抗的肝细胞继续分别用含有10、100和1000 ng/ml右美托咪定的培养液培养24 h后,葡萄糖消耗量出现显著性升高。随着胰岛素抵抗的发生而升高的BIP及ERp29的RNA及蛋白水平均在右美托咪定作用后出现显著性降低,且伴有Akt磷酸化水平的升高和PEPCK及G6Pase的蛋白表达水平的降低。研究结论右美托咪定可以改善肝细胞的胰岛素抵抗,降低糖异生与糖原分解,其机制可能与下调内质网应激反应蛋白BIP和ERp29,逆转磷酸化Akt的活性有关。