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本文以长春花[Catharanthus_roseus(L.)G. Don]幼嫩叶片为外植体,诱导和筛选愈伤组织,讨论了不同光照对愈伤组织增殖的影响,研究了生长周期中生理生化特性和次生代谢物质积累的规律;并对其快速繁殖作了初步探讨,为长春花细胞培养积累资料。 实验结果如下: 1、以长春花幼嫩叶片为外植体,不同种类、不同浓度的植物生长调节物质及其组合对愈伤组织诱导的效应均不相同;长春花愈伤组织诱导的最佳培养基是NAA0.5mg/L+2,4-D0.5mg/L+6-BA2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。 2、光照和黑暗对愈伤组织增殖的影响:在光照和黑暗下,生长周期均为27d,增殖曲线呈“S”型,可大致分为延迟期(0~9d)、指数生长期(9~24d)和静止期(24~27d)。光照条件下愈伤组织生长稍快。 3、在愈伤组织增殖的过程中,分别对其可溶性蛋白质含量、过氧化物酶、超氧化物歧化酶和酯酶的活性进行了测定和分析,结果表明它们都发生了各自特征性的变化。 4、培养细胞中次生代谢物质的积累:光照和黑暗条件下生物碱的含量变化不尽相同,但第12d均出现一个峰值,并且从第18d起生物碱的含量呈上升趋势。从生物碱的产量来看,在第27d产量达到最大值,因此收获的最佳时期为第27d。最终,黑暗条件下生物碱的产量比光照时的高。 5、再分化的初步研究表明:利用由叶片诱导而来的愈伤组织在培养基(2)(3)上均能分化出芽点,虽最初芽分化率不高,但可以大量增殖。芽增殖的最佳培养基为MS+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。试管苗的生根培养基配方为1/2MS+蔗糖20g/L+琼脂7g/L+NAA或IBA,NAA及IBA浓度以低于0.5mg/L为宜,否则再生的根会再次愈伤化。