结球甘蓝(Brassica oleracea var. capitata L.)(以下简称甘蓝)是十分重要的十字花科芸薹属蔬菜作物,在我国蔬菜周年供应和出口贸易中处于重要地位。随着分子生物学的快速发展,分子标记技术在遗传图谱绘制、重要农艺性状基因定位、生物遗传多样性分析、遗传进化分析、品种鉴定等方面得到广泛应用。其中,简单重复序列(Simple sequence repeat, SSR)标记技术因多态性高,易检测,共显性和特异性明显等特点应用更加普遍。鉴于已公开报道可用的甘蓝SSR标记数量较少,本研究基于NCBI数据库公开报道的62,576条与甘蓝相关的EST,研究开发了EST-SSR标记,并将其应用于甘蓝指纹图谱构建、杂交种纯度鉴定、与甘蓝显性雄性不育基因连锁的分子标记等。主要研究结果如下1、甘蓝EST-SSR特征及扩增分析。利用SSRIT在线分析软件(http://www.gramene.org/db/searches/ssrtool)对19,611条无冗余甘蓝EST进行了搜索,共得到1,219条SSR,分布在1,176条EST上,分布密度为1/11.48kb,包括273种重复基元。其中,二核苷酸(353个SSR)和三核苷酸(423个SSR)占主导地位；出现最多的重复基元是AG/CT,占总数的25.59%,其次为AAG/CTT占7.71%；其它重复类型所占比例均不足5%。基于1,176条含有SSR的EST,设计合成了978对甘蓝EST-SSR引物。以早熟圆球型甘蓝397和晚熟扁圆球型甘蓝20-2-5两份自交系为试材,对合成引物进行初步的扩增分析,其中897对引物有扩增产物,共扩增出1,026条扩增带；128对引物在两份材料间表现出多态性,共扩增258条多态性带(占总带数的25.15%)。表明开发的EST-SSR引物在甘蓝上有较好的可用性。2、构建了部分甘蓝品种的指纹图谱并进行“京丰1号”的纯度鉴定。在对甘蓝EST-SSR初步扩增分析的基础上,利用BoE002.BoE222.BoE225和BoE916等4对引物构建了“中甘11”、“8398"、“中甘15”和“中甘21”等4个春甘蓝及其亲本的EST-SSR指纹图谱；利用BoE974.BOE9]6.BoE337.BoE316和BoE222等5对引物构建了“京丰1号”、“晚丰”、“中甘8号”、“中甘18”、“中甘19”和“中甘22”等6个秋甘蓝及其亲本的EST-SSR指纹图谱。利用能够扩增出互补带型的标记BoE222进行“京丰1号”杂交种的分子鉴定,种子纯度鉴定为90%,与田间鉴定结果吻合率约为98%。3、获得了与早熟圆球型甘蓝显性雄性不育基因CDMs399-3连锁的分子标记。以来自早熟圆球甘蓝397育性分离群体的5株可育株及4株纯合不育株分别构建可育池和不育池,并以该群体的敏感不育单株自交得到的73株F2分离群体的植株为试材,筛选与早熟圆球甘蓝显性雄性不育基因连锁的标记,结果得到共显性标记BoE332(不育片段约270bp,可育片段约290bp),该标记与显性雄性不育基因CDMs399-3连锁距离为3.6cM,可应用于纯合不育单株的快速鉴定,加速了397显性雄性不育系的选育进程。