论文部分内容阅读
人参,又有"百草之王"之称,在中国乃至世界,人参是应用历史最悠久、临床价值最高的中草药之一。人参皂甙单体Rb1(ginsenoside Rb1,GRb1)和Rg1(ginsenoside Rg1,GRg1)是人参皂甙的主要有效成分,它们具有多种功效,对于人体的多种器官、组织及细胞都具有重要的调控作用。本论文以原代培养的支持细胞为模型,比较了GRb1和GRg1对支持细胞(Sertoli cell)的药理作用,为进一步研究它们药理作用机制提供理论基础。采用两步酶消化法分离出生后3～7天的ICR小鼠睾丸支持细胞,用多次贴壁和多次离心法纯化支持细胞,用中间纤维波形蛋白(vimentin)多克隆抗体和α-平滑肌肌动蛋白(α-actin)抗体进行免疫细胞化学实验,检测到所分离的支持细胞纯度达到95%±1.2%。首先利用细胞培养技术研究GRb1和GRg1分别对支持细胞增殖的影响。利用MTT比色法检测其对细胞生长活力的影响,用S期BrdU标记法检测支持细胞的增殖。结果表明GRb1能促进支持细胞的存活和增殖,浓度为20μg/ml的GRb1对支持细胞的增殖最显著;而GRg1对支持细胞的活力无明显影响。然后研究GRb1和GRg1分别对支持细胞GDNF表达的影响。用不同浓度的GRb1和GRg1处理支持细胞24小时后,进行RT-PCR检测和免疫细胞化学分析,结果都表明GRb1能刺激支持细胞内GDNF mRNA的表达,即GRb1促进了支持细胞对GDNF的分泌,但GRb1浓度对支持细胞GDNF表达的影响不明显;而GRg1支持细胞内GDNF的表达影响不显著。胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrphic factor,GDNF)是转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)超家族的一个亚族,它的受体有GFRα1, c-Ret和NCAM,通过RT-PCR检测和免疫细胞化学分析,结果发现GDNF对支持细胞作用的信号通路是GDNF-GFRα1/NCAM。通过本研究发现GRg1对支持细胞的增殖及GDNF的表达都无明显影响,GRb1能促进支持细胞的增殖,而且它能明显刺激支持细胞中GDNF分泌的增