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猪瘟是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种严重危害养猪业的烈性动物传染病。天然免疫系统是机体抵抗病毒感染的第一道防线,其中干扰素(IFN)和干扰素刺激基因(ISGs)在宿主抗病毒防御过程中发挥着关键作用。猪瘟病毒(CSFV)感染宿主后,激活I型IFN信号通路,诱导其下游的ISGs转录表达,进而发挥抗CSFV作用。实验室前期实验筛选到猪源2’-5’寡腺苷酸合成酶样蛋白(pOASL)为潜在的抗CSFV ISG分子,但其抗病毒分子机制尚不清楚。本研究旨在证实pOASL的抗CSFV活性,并解析其抑制CSFV复制的分子机制。我们构建了过表达pOASL的PK-15细胞系(PK-pOASL)和对照细胞系PK-EGFP,将CSFVShimen株感染过表达细胞系,从CSFV滴度、基因组拷贝数及非结构蛋白Npro表达水平三个方面评价CSFV的复制水平,结果表明过表达pOASL抑制CSFV复制;相反,利用siRNA下调PK-15细胞中的内源性OASL蛋白后,感染rCSFV-Fluc或CSFV-SM株,证实下调内源性OASL促进CSFV复制。过表达及下调pOASL试验均证实pOASL是一种抗CSFV ISG分子。在pOASL抗CSFV分子机制方面:首先,我们利用siRNA下调内源性RNaseL后,pOASL仍具有抑制CSFV复制的活性,说明pOASL抑制CSFV复制不依赖经典的OAS/RNaseL通路;其次,通过双荧光素酶报告试验证实过表达pOASL能够增强IFN-β3信号通路。通过免疫共沉淀(Co-IP)试验筛选到pOASL与MDA5蛋白存在直接的相互作用,且证实pOASL能够增强MDA5介导的1型IFN信号通路;最后,我们通过siRNA下调内源性MDA5和RIG-I表达,进一步证实pOASL发挥抗CSFV效应依赖于MDA5介导的I型IFN信号通路。综上所述,我们证实,pOASL是一种抗CSFV宿主分子;并阐明pOASL抗CSFV复制的分子机制:pOASL通过增强MDA5介导的IFN-β信号通路,进而发挥抗CSFV作用。