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第一章高迁移率族蛋白-1在系统性红斑狼疮和盘状红斑狼疮患者皮损组织中的表达目的研究红斑狼疮患者皮损中高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)的表达情况,初步探讨其在红斑狼疮发病机制中的作用。方法采用免疫组织化学及Western-blot法检测正常人皮肤、DLE患者及SLE患者皮损组织中HMGB-1表达。结果正常人皮肤组织HMGB-1主要表达于表皮角质形成细胞胞核中。DLE患者皮损区HMGB-1主要表达于真皮浸润的单个核细胞中,表皮角质形成细胞HMGB-1仍为核表达,但阳性表达细胞的百分比较正常人减少(t=11.315,P＜0.01);非皮损区HMGB-1表达的部位仍为细胞核表达且阳性细胞百分比与正常人相比无显著差异(P＞0.05),同时HMGB-1蛋白表达总量与正常人比较无显著差异(t=0.681,P＞0.05);SLE患者皮损中除真皮浸润的单个核细胞仍为阳性表达外,皮损区细胞外及表皮细胞胞浆出现HMGB-1阳性表达,而表皮HMGB-1核表达阳性细胞的百分比低于DLE患者(t=6.821,P＜0.01),非皮损区HMGB-1的表达部位及阳性细胞百分比与正常人相比仍无显著差异(P＞0.05);HMGB-1表达总量分别较正常人及DLE患者显著上调(t=15.494,P＜0.01;t=13.221,P＜0.01),且其表达强度与SLEDAI及尿蛋白升高相关(r=0.565,P＜0.01;OR=1.027,P＜0.05)。结论红斑狼疮患者皮损中HMGB-1表达部位及表达水平呈不同程度改变,存在亚细胞移位且表达强度增强,同时SLE与DLE皮损HMGB-1表达部位及表达水平存在差异,提示HMGB-1可能参与红斑狼疮的炎症机制。第二章高迁移率族蛋白-1在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及移位目的观察SLE患者外周血单个核细胞中HMGB-1表达水平和脂多糖干预下HMGB-1的细胞内移位的特点,探讨HMGB-1在SLE发病机制中的作用。方法采用western-blot方法检测39例SLE患者和39例正常对照者血清中HMGB-1的表达水平。然后分别在两组PBMCs培养液中加入200ng/ml脂多糖,采用实时荧光定量PCR技术检测并比较刺激前后SLE患者组与正常对照组HMGB-1mRNA的表达水平。同时用细胞免疫荧光法动态观察脂多糖刺激后不同时间点HMGB-1细胞内移位的变化。采用sandwich ELISA法观察脂多糖诱导PBMCs分泌HMGB-1的变化特点。结果SLE患者组血清中HMGB-1的浓度显著高于正常对照组(P＜0.01),且其新鲜分离的外周血单个核细胞中HMGB-1 mRNA的表达水平上调。LPS刺激前后SLE患者组和正常对照组PBMCs中HMGB-1 mRNA的表达均未发生改变(P＞0.05)。LPS刺激两组单个核细胞内HMGB-1由细胞核至细胞浆移位的类型和发生时间一致,且各时间点胞内HMGB-1含量在两组间无差别。LPS诱导HMGB-1的释放呈时间依赖性增加,其释放水平在SLE患者尤其是伴有蛋白尿者中显著增高。结论SLE患者的HMGB-1蛋白及mRNA表达水平增高,提示HMGB-1可能参与红斑狼疮的发病机制。HMGB-1在SLE患者尤其是伴有蛋白尿患者的炎症因子刺激局部显著升高并可能由此导致免疫损伤。第三章高迁移率族蛋白-1干预对外周血单个核细胞产生TNFα及IL-6的调节作用目的研究HMGB-1通过对PBMCs产生TNFα和IL-6分泌的作用研究其对下游原炎症细胞因子的免疫调节作用,进一步探讨其在SLE中的发病机制。方法分离SLE患者和正常对照者的PBMCs,分别加入HMGB-1(1μg/ml)或LPS(100ng/ml)或不加刺激剂连续培养不同时间,采用ELISA方法检测培养上清中各时间点TNFα和IL-6的分泌水平;RT-PCT技术检测HMGB-1(1μg/ml)干预引起的TNFαmRNA表达的改变。结果LPS或HMGB-1刺激引起SLE患者单个核细胞释放TNFα的水平均较正常对照者降低。其中,HMGB-1诱导SLE患者PBMCs持续分泌低水平的TNFα,而其IL-6的分泌水平较正常组增高且延迟。HMGB-1刺激引起SLE患者PBMCs中TNFαmRNA表达水平降低。结论HMGB-1可能通过诱导SLE患者的TNFα分泌缺陷引起固有免疫反应缺陷;而HMGB-1干预引起SLE患者产生TNFα和IL-6的失衡有助于诱导SLE的局部免疫紊乱。