基于nNOS表达的攒竹透睛明针刺治疗弱视作用机制研究

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目的:本研究应用免疫组化和Western Blot技术,对被认为是光和视觉输入激发视觉中枢神经元活性的功能性标志和视觉中枢神经元发育可塑性程度的nNOS蛋白在视皮质17区和外侧膝状体的表达进行检测,比较正常发育、单眼视觉剥夺以及针刺干预大鼠的视觉信号传导功能及视皮质和外侧膝状体蛋白的表达量,验证针刺对视皮质及外侧膝状体可塑性的促进作用,为阐明攒竹透睛明针刺治疗弱视的机制研究提供新思路。方法:清洁级14日龄的wistar大鼠60只,按随机数字表法分成以下5组,每组12只,分别为:空白组、模型组、攒竹透睛明早期针刺组、攒竹透睛明中期针刺组和攒竹透睛明末期针刺组。选取0.22mm×25mm的毫针进行针刺治疗,单眼剥夺早期针刺组于模型复制后第8天开始针刺,单眼剥夺中期针刺组于模型复制后第15天开始针刺,单眼剥夺末期针刺组于模型复制后第22天开始针刺,攒竹穴斜刺向睛明5mm,采用平补平泻的手法,每日治疗1次,每次治疗10分钟,治疗周期为7天。治疗结束后进行P-VEP检测,并应用免疫组化和Western Blot技术,对nNOS蛋白在视皮质17区和外侧膝状体的表达进行检测,比较正常发育、单眼视觉剥夺以及针刺干预大鼠的视觉信号传导功能及视皮质和外侧膝状体蛋白的表达量。结果:针刺治疗后,早期针刺组和中期针刺组P-VEP波峰出现的时值和幅值与模型组相比,时值降低,有统计学差异(P<0.05),说明在视觉剥夺早期和中期攒竹透睛明针刺能够减少视觉剥夺的损害;在视皮质17区nNOS的表达正常组与模型组相比有统计学差异(P<0.05),与模型组相比较,早期针刺组和中期针刺组有统计学差异(P<0.05),而末期针刺组的荧光强度并没有统计学差异(P>0.05)。说明在视觉剥夺早期和中期攒竹透睛明针刺能够促进视皮质17区nNOS的表达。在外侧膝状体nNOS的表达正常组与模型组相比有统计学差异(P<0.05),与模型组相比较,早期针刺组和中期针刺组有统计学差异(P<0.05),而末期针刺组的荧光强度并没有统计学差异(P>0.05)。说明在视觉剥夺早期和中期攒竹透睛明针刺能够促进外侧膝状体nNOS阳性神经元的表达。视皮质17区正常组nNOS表达明显高于模型组。与模型组相比较,早期针刺组和中期针刺组nNOS表达明显高于模型组,而末期针刺组nNOS表达则差异不明显。外侧膝状体正常组nNOS表达明显高于模型组。与模型组相比较,早期针刺组和中期针刺组nNOS表达明显高于模型组,而末期针刺组nNOS表达则差异不明显。说明在视觉剥夺早期和中期攒竹透睛明针刺能够促进视皮质17区外侧膝状体nNOS蛋白的表达。结论:(1)针灸治疗弱视的总有效率明显优于临床传统疗法,其临床疗效值得肯定;(2)攒竹透睛明针刺对单眼视觉剥夺大鼠的异常P-VEP波形改变具有明显的改善作用;(3)攒竹透睛明针刺对早期和中期单眼剥夺组大鼠视皮质17区和外侧膝状体nNOS阳性细胞表达有调节作用,这可能是攒竹透睛明针刺干预视觉剥夺性损害的生物学机制之一。(4)攒竹透睛明针刺对早期和中期单眼剥夺组大鼠视皮质17区和外侧膝状体nNOS蛋白的表达也有调节作用,这可能也是攒竹透睛明针刺干预视觉剥夺性损害的生物学机制之一。(5)攒竹透睛明针刺激活相关因子的活性,保护失去光刺激下的视觉神经系统的损伤,促进视觉系统的发育,从而改善整个视觉系统的功能。
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