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目的：建立模拟皮肤正常生理状态的黑素细胞培养体系,观察不同细胞因子对黑素细胞生物活性的影响,包括黑素细胞的增殖、黑素细胞酪氨酸酶的活性和黑素细胞的凋亡,从而研究色素障碍性皮肤病的发病机制,为色素性疾病的治疗提供新的思路。方法：1、建立不添加霍乱毒素(cholera toxin, CT)、12-O-十四烷酰佛波醋酸酯-13(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)和3-异丁基-1-甲基黄嘌吟(3-isobutyl-1-methylxanthine, IBMX)的正常人表皮黑素细胞培养体系；2、检测不同浓度细胞因子白介素IL-10, IL-17, IL-22, IL-23对黑素细胞增殖活性的影响(CCK-8法)；3、检测不同浓度IL-10, IL-17, IL-22, IL-23对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响(L-DOPA法)；4、流式细胞仪检测不同浓度IL-10, IL-17, IL-22, IL-23对黑素细胞凋亡的影响,全部数据采用SPSS统计软件10.0版进行分析。结果：1、采用添加人黑素细胞生长添加剂(Human Melanocyte Growth Supplement-2, HMGS-2)的Medium254培养基后可获得大量纯化的黑素细胞。2、50ng/mL IL-10组对黑素细胞的增殖率随着培养时间的延长而升高,当培养48h和72h后与空白对照组相比有极显著的统计学差异(P<0.01)。但随着IL-10浓度的升高,其增殖率随着培养时间的延长反而有下降趋势,200ng/mL IL-10组培养黑素细胞48h和72h后与空白对照组相比有统计学差异(P<0.05)。3、IL-17随着培养时间的延长呈剂量依赖性抑制黑素细胞的增殖,50ng/mL IL-17组培养黑素细胞48h和72h后与空白对照组相比有统计学差异(P<0.05)；100ng/mL IL-17组和200ng/mL IL-17组培养黑素细胞48h和72h后与空白对照组相比有极显著的统计学差异(P<0.01)。4、IL-22随着浓度的增加呈明显的时间依赖性抑制黑素细胞的增殖,当培养时间为24h时,只有200ng/mL IL-22组与空白对照组相比有统计学差异(P<0.05)；当培养时间为48h时,50ng/mL、100ng/mL和200ng/mL IL-22组与空白对照组相比均有统计学差异(P<0.05)；当培养时间为72h时,25ng/mL和50ng/mL IL-22组均抑制黑素细胞的增殖,与空白对照组相比有统计学差异(P<0.05),100ng/mL和200ng/mL IL-22组与空白对照组相比有极显著的统计学差异(P<0.01)。5、IL-23随着浓度的增加呈时间依赖性抑制黑素细胞的增殖,当培养时间为24h时,200ng/mL IL-23组与空白对照组相比有统计学差异(P<0.05)；当培养时间为48h时,100ng/mL和200ng/mL IL-22组与空白对照组相比均有统计学差异(P<0.05)；当培养时间为72h时,50ng/mL、100ng/mL和200ng/mL IL-23组与空白对照组相比均有统计学差异(P<0.05)；且200ng/mL IL-23组在培养黑素细胞48h和72h时与空白对照组相比均有极显著的统计学差异(P<0.01)。6、黑素细胞酪氨酸酶的活性检测：在培养48h后,50ng/mL IL-10组黑素细胞酪氨酸酶活性升高,较空白对照组有统计学差异(P<0.05)。50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL IL-17组和IL-22组均抑制黑素细胞酪氨酸酶的活性,与空白对照组相比有统计学差异(P<0.05)。100ng/mL和200ng/mL IL-23组抑制酪氨酸酶的活性,与空白对照组相比有统计学差异(P<0.05)。7、用浓度为100ng/ml的IL-10, IL-17, IL-22, IL-23培养黑素细胞,48小时后细胞凋亡率分别为5.2%、32.1%、23.0%、23.0%,空白对照组为5.1%,IL-10与空白对照组相比无明显差别,IL-17, IL-22, IL-23培养后黑素细胞的凋亡率与空白对照组相比有一定的差别。结论：1、使用添加HMGS-2的Medium254培养基,同时采用分离酶Ⅱ消化法、两段法、胰蛋白酶差速消化法可去除角质形成细胞、成纤维细胞,并获得大量纯化的黑素细胞。2、IL-10浓度为50ng/mL时对黑素细胞起增殖作用,但是当浓度升高为200ng/mL时IL-10对黑素细胞的生长反而有抑制作用,与其对酪氨酸酶活性的影响相一致。实验结果提示适当浓度的IL-10可促进黑素细胞的增殖,提高酪氨酸酶的活性。3、IL-22随着浓度的增加抑制黑素细胞的增殖,呈明显的时间依赖性,当培养时间为72h时,所有浓度均抑制黑素细胞的增殖,黑素细胞酪氨酸酶活性也随着IL-22浓度的增加而降低,黑素细胞凋亡率较空白对照组明显升高,均提示IL-22可引起黑素细胞的损伤。4、IL-17和IL-23在高浓度时对体外培养的正常人黑素细胞的生长和酪氨酸酶的活性有抑制作用,且随着培养时间的延长与空白对照组差异越大,黑素细胞凋亡率也较空白对照组明显升高,提示IL-17和IL-23对黑素细胞有损伤作用,但其作用机制还需进一步的试验和探讨。