论文部分内容阅读
本课题研究了HPLC法直接测定大枣提取液中cAMP含量的方法。采用氯化钡溶液除去多糖、果胶等大分子对色谱柱的影响，确定了HPLC法直接测定提取液中cAMP含量的色谱条件：色谱柱Shim-Pack VP-ODS，流动相为甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钾缓冲液(30：70，V/V)，流速0.6mL/min，检测波长258nm，柱温25℃，进样量20μL。根据标准样的浓度及样品和标准样的峰面积比值来计算样品中cAMP的浓度。
探论了从大枣中提取cAMP的方法及工艺条件，确定提取方法为热水浸提法，通过正交试验得出最佳的提取条件为：料液比1:10，提取温度100℃，提取时间15min，提取级数为两级，cAMP提取率为153.5 μg/g。高压液相色谱法测定提取液中cAMP的浓度为11.3-14.5：mg/L。提取液采用硅藻土粗土细土(1:1)混合助滤澄清法除去提取液中的杂质，确定添加量为1﹪，提取液在625nm下透光度为71.5﹪，cAMP回收率为93.3﹪。
对提取液中cAMP的进一步分离进行了研究。D293大孔阴离子交换树脂分离cAMP效果最好。操作参数为：分离柱的径高比为1:10，预处理树脂所带的可交换离子为氯型，提取液调pH6.0直接上柱，上样流速为1.5mL/min，洗脱液选择(0.4-0.6)M NH<,4>C0-0.1M HCI，洗脱流速为0.7mL/min梯度洗脱，树脂的工作交换容量为0.72mmol/mL。洗脱液中cAMP浓度为44.0-60.4mg/L，回收率为87.6﹪-90.5﹪，纯度12.2﹪-15.5﹪，颜色为褐色。
比较了各种脱色剂对D293洗脱液的脱色效果。实验表明氧化铝脱色效果最佳，具体操作为：0.6M HC1-Tris缓冲溶液平衡氧化铝柱，上样溶液调pH值7.5，上样量3mL/g(干)，0.6M HCl-Tris缓冲溶液洗脱，洗脱液中cAMP浓度为63.4-80.4 mg/L，纯度42.6-64.7﹪，颜色接近无色。
确定了提取液中分离cAMP的路线，上两次D293离子交换柱一次中性氧化铝柱后，洗脱液减压浓缩结晶，采用紫外分光光度计法测定cAMP的纯度为92.3﹪。