蝴蝶花的生药学及其体外抗肿瘤活性研究

来源 :西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shenyang0623
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目的:蝴蝶花Iris japonica Thunb.为鸢尾科鸢尾属多年生草本植物,在我国分布非常广泛,常用作民间草药及园林绿化植物,具有消肿止痛,清热解毒的功效。具有药用资源开发的广阔前景。由于蝴蝶花的使用一直停留在民间,又常常与药材射干和川射干混用,我们采用传统的一般鉴定方法结合现在新型鉴别方法DNA分子标记技术,从而明确该药材的来源,不仅保证了临床用药的安全性,与有效性,同时也为合理用药提供一定的科学依据。,而目前针对蝴蝶花系统性研究甚少,系统的进行蝴蝶花生药学研究,我们采用传统的一般鉴定方法结合现在新型鉴别方法DNA分子标记技术,从而明确该药材的来源,不仅保证了临床用药的安全性,与有效性,同时也为合理用药提供一定的科学依据。同时针对五种不同的细胞株对蝴蝶花进行抗肿瘤有效溶剂部位的筛选,为后续研究蝴蝶花抗肿瘤活性成分,以及蝴蝶花有效成分抗肿瘤机制,提供一个初步理论基础以及有力的实验依据。方法:首先本文是采用了来源鉴定、性状鉴定、显微鉴定、薄层色谱法、理化鉴定方法研究了蝴蝶花生药学。然后对蝴蝶花及其近缘物种进行基于ISSR和SCoT的分子标记的DNA分子鉴别。具体包括对蝴蝶花基源进行调查,对它的性状进行观察描述,对它的粉末和组织结构进行显微特征观察,对它所含成分进行理化鉴别。同时以不同极性的有机溶剂依次回流提取蝴蝶花总浸膏(硅胶干法拌样),得到五种不同的溶剂提取部位的样品,对人肝癌细胞株Hep G2,人宫颈癌细胞株Hela,人肺腺癌细胞A549,人结肠癌细胞株Hccc-9810和人大细胞肺癌细胞株H460进行体外培养,以CCK-8法测定蝴蝶花不同溶剂部位样品对体外五种肿瘤细胞增殖作用的影响,并用五氟尿嘧啶和蝴蝶花中含有的两种标品(鸢尾黄素、芹菜素)做阳性对照,筛选出对肿瘤增殖抑制率较高的部位和较敏感的肿瘤细胞株,对肿瘤细胞的增殖抑制率进行检测,采用Graph Pad Prism5软件计算IC50。结果:1.蝴蝶花(Iris japonica.)为鸢尾科鸢尾属植物蝴蝶花,多年生草本,茎直立。其根茎药材呈现不规则条状,常弯曲,通常不分枝,但具有不规则纵向皱纹,节间明显,且呈环状凸起,有干燥的叶柄或叶柄残基在它上面残留。根茎横切面具有大量叶迹维管束、纤维束,中柱鞘有许多维管束包围组成,散在大量草酸钙柱晶和方晶,粉末中发现石细胞,星状毛,网纹导管为主,纤维常成束,薄壁细胞壁呈不规则多面体形。理化实验发现含有黄酮、三萜类物质。薄层鉴别以氯仿-甲醇-冰醋酸(10-2-0.2)为展开剂,发现蝴蝶花根茎提取物分离度良好,结果显示鸢尾黄素和芹菜素对应位置斑点较明显。2.分子鉴别中筛选出的10条ISSR引物和SCoT引物,对蝴蝶花及其近缘物种共12份材料,分别扩增出130和143条带,多态性条带百分率分别为96.2%和97.9%。12份材料间的Shannon多样性信息指数(I)分别为0.5402和0.5003;Nei’s基因多样度指数(H)分别为0.3630和0.3273,表明12份材料间遗传差异较大。基于SCoT标记分析获得的遗传距离高于ISSR标记分析获得的遗传距离。基于SCoT标记聚类分析表明,在相似系数高于0.74时蝴蝶花、射干、川射干均能独立成支,能较好地与鸢尾属其他材料进行区分。3.体外抗肿瘤活性实验表明,不同极性溶剂的提取物和三阳性对照药物对人宫颈癌Hela细胞株均有一定的增殖抑制作用,同时对人肝癌Hep G2细胞株,人肺腺癌A549细胞,人结肠癌Hccc-9810细胞,人大细胞肺癌H460细胞也有一定的增殖抑制作用,通过计算比较各阳性对照药材和不同溶剂提取部位对五种不同肿瘤细胞株的增殖抑制率以及其IC50值,发现蝴蝶花中乙酸乙酯和正丁醇两个溶剂部位都能有效的抑制肿瘤增长,表现出较好的活性,且呈现出良好的剂量-量效关系,乙酸乙酯部位对Hep G2细胞增殖的抑制效果最好,IC50为53.08μg/ml,正丁醇部位对Hep G2人肝癌细胞株抑制作用较强,其IC50为174.91μg/ml,而石油醚部位高浓度呈现很小的抑制作用,95%乙醇部位不管给药浓度高低均无抑制作用,表明蝴蝶花抗肿瘤活性成分主要集中在乙酸乙酯部位和正丁醇部位。结论:以传统鉴别和分子鉴别相结合,确定蝴蝶花的基源及其近缘物种的亲缘关系。为蝴蝶花的药用开发提供系统的理论依据,建立较好且能稳定区分蝴蝶花品种的方法。以CCK-8法对蝴蝶花体外抗肿瘤活性进行研究,选取实验中培养的五种肿瘤细胞株,发现可以通过计算不同溶剂提取部位对他们的抑制率以及IC50值,可以得出,蝴蝶花的乙酸乙酯部位和正丁醇部位可以明显不同程度抑制肿瘤细胞的增殖,石油醚部位以及95%乙醇部位基本无抗肿瘤活性,为进一步研究蝴蝶花抗肿瘤活性成分奠定了理论和实验基础。
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