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第一部分 低氧心肌细胞周期变化与TERT表达调控 目的 研究大鼠心肌细胞低氧状态下细胞周期变化、缺氧过程中端粒酶逆转录酶(TERT)基因表达的变化以及TERT启动子活力的影响因素,初步了解缺氧是否影响心肌细胞TERT启动子活力。 方法 采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,置于5%CO2+95%N2孵箱中培养,建立心肌缺血模型。实验分三组:1.正常对照组;2.缺血6小时模型组;3.缺血12小时模型组。以流式细胞仪测定心肌细胞周期,RT-PCR检测心肌细胞TERT表达。构建含TERT启动子的pEGFP质粒转染心肌细胞,缺氧处理后,通过激光共聚焦显微镜观察搏动心肌细胞绿色荧光蛋白表达。分析缺氧对TERT启动子表达的影响。 结果 心肌细胞经过缺氧6h处理后,其细胞周期中S期比例增高,与对照组相比差异显著(P<0.01)。TERT在胎鼠心肌细胞中有明显表达,在培养5天后表达明显减弱,培养5天的心肌细胞经过缺氧处理6小时,TERT表达增强。含有TERT启动子PEGFP质粒转染心肌细胞后,初步观察到缺氧可以激活启动子而使绿色荧光蛋白表达。 结论 本研究缺氧6小时与正常组和12小时缺氧相比S期百分比明显增高,观测到TERT表达,可能缺氧激活了TERT启动子,促进了TERT的表达而增加端粒酶活性。反映在缺氧所致死亡、凋亡过程中心肌细胞经历了一定程度的增殖过程,表明在心肌细胞一定程度上具有增殖能力。