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基因组的复制是病毒复制周期中非常重要的步骤。由于缺乏有效的从头感染体系，对两个人类肿瘤相关疱疹病毒的裂解期复制机理的研究，很大程度上受限于只能采用病毒从潜伏复制再激活到裂解复制的系统。MHV-68可以在体外培养细胞里高效复制，为研究肿瘤相关疱疹病毒从头感染过程中的裂解期DNA复制机理提供了良好的模型。通过采用de novo infection-replication实验，我们已经鉴定了MHV-68的右端oriLyt，在本研究中，我们又鉴定了MHV-68的左端oriLyt。首先，我们用转座子介导的高密度突变的方法，系统的分析了右端oriLyt中的重要顺式元件，找到了右端oriLyt的核心区域，并发现该120bp区域在病毒基因组的左端有一段高度同源区域。我们克隆了包含该同源区域的1.2kb的DNA片段，并通过de novo infection-replication实验发现其中确实含有另一个oriLyt。通过删除突变和点突变对MHV-68左端oriLyt进行系统的分析，我们发现CCAAT box对oriLyt驱动的裂解期DNA复制有至关重要的功能，而AT-tich回文序列有重要的功能。但是，GC-rich重复序列不是MHV-68两个oriLyt的重要顺式元件。我们还发现，一个细胞里广泛存在的转录因子NF-Y，在EMSA实验中可以结合到CCAAT box上，在ChIP实验中也可以结合到oriLyt的核心区域。通过NF-Y的负显性蛋白抑制实验，我们发现NF-Y在MHV-68的从头感染过程中的裂解期DNA复制中行使重要的作用。此外，我们还发现另两个细胞转录因子，C/EBP和Pbx，也可以结合到MHV-68 oriLyt的核心区域；此外，NF-Y、C/EBP和Pbx都可以结合到KSHV oriLyt的核心区域。为了构建基于MHV-68的amplicon病毒载体，我们首先鉴定了MHV-68的DNA包装信号，构建了多个amplicon vector，以及病毒载体包装所需的TR-deleted helper BAC。在接下来的病毒载体包装实验中，我们发现，我们所构建的amplicon vector通过helper BAC确实可以被包装进入病毒颗粒，并将外源基因转移进入其它细胞。