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背景:尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UDP-glucuronosyltransferase 1A1,UGT1A1)是体内Ⅱ相代谢的主要酶系之一,在维系多种内源物代谢平衡与外源物代谢清除中扮演重要的角色。核因子-κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)是炎症反应中的关键因子,其对多种代谢酶和转运体的潜在作用近来引发广泛关注。而蛋白激酶C(Potein kinase C,PKC)是NF-κB的一种上游激酶,可通过促进NF-κB阻抑蛋白(IκBs)的磷酸化和解离来激活NF-κB,进而调控下游靶基因的表达。熊果酸(Ursolic acid,UA)与其同分异构体齐墩果酸(Oleanolic acid,OA)同属于五环三萜类药物,具有保肝、抗炎、抗肿瘤等生物学功能。有研究表明,UA和OA对PKC/NF-κB通路有确切的影响;我们前期研究证实UA和OA可诱导HepG2细胞中UGT1A1的表达,据此我们推测PKC/NF-κB信号通路可能参与了UA和OA对HepG2细胞中UGT1A1靶基因的调控作用。目的:探讨PKC/NF-κB信号通路对HepG2细胞中UGT1A1靶基因表达的影响,并基于PKC/NF-κB信号通路深入研究UA和OA对UGT1A1靶基因的调控机制,为防治UGT1A1介导的胆红素代谢性疾病及临床药物-药物相互作用提供理论依据。方法:1、采用Western blot、RT-qPCR、免疫荧光等研究方法,探究PKC/NF-κB信号通路对HepG2细胞中UGT1A1靶基因表达的影响以及UA和OA对PKC/NF-κB信号通路及UGT1A1靶基因的影响。2、通过质粒构建、瞬时共转染及双荧光素酶报告基因法,探究UA及OA通过PKC/NF-κB信号通路对共转染hp65过表达质粒的HepG2细胞中UGT1A1报告基因活性的影响。3、采用慢病毒shRNA干扰技术,探究UA及OA对hp65基因沉默后HepG2细胞中UGT1A1靶基因表达的影响。结果:1、UA和OA对HepG2细胞中PKC/NF-κB调控通路及UGT1A1靶基因表达的影响(1)PKC激动剂PMA(100 nM)和NF-κB激动剂LPS(10μg/mL)诱导的PKC/NF-κB通路激活可下调UGT1A1 mRNA和蛋白的表达,而20μM的NF-κB抑制剂PDTC可逆转PMA对UGT1A1 mRNA和蛋白表达的下调作用。(2)40μM的UA和OA阻断了PMA(100 nM)和LPS(10μg/mL)诱导的PKC/NF-κB信号通路的活化。(3)UA和OA(10、20、40μM)可浓度依赖性的上调UGT1A1的蛋白水平;UA、OA(20、40μM)能逆转PMA(100 nM)和LPS(10μg/mL)对UGT1A1蛋白表达的下调作用。2、UA和OA对瞬时共转染hp65的HepG2细胞中UGT1A1报告基因活性的影响(1)在瞬时共转染hp65的HepG2细胞中,LPS(10μg/mL)可抑制hp65介导的UGT1A1报告基因活性,当与PDTC(20μM)及40μM的UA或OA共同作用时,这种抑制作用可被逆转。(2)在瞬时共转染hp65的HepG2细胞中,PMA(100 nM)可抑制hp65介导的UGT1A1报告基因活性,与hPKCα过表达质粒(100 ng)共转染后,这种抑制作用轻度增加;而当与Go6983(10μM),PDTC(20μM)及40μM的UA或OA共同干预作用时,这种抑制作用可被逆转。3、UA和OA对hp65沉默的HepG2细胞中UGT1A1靶基因表达的影响(1)在hp65沉默的HepG2细胞中,PMA和LPS对UGT1A1的mRNA和蛋白表达的下调作用消失。(2)与对照组相比,hp65沉默后,UA和OA(40μM)对UGT1A1所表现出的诱导作用显著降低。结论:1、LPS诱导的NF-κB通路活化可下调UGT1A1靶基因的表达水平;PMA依赖的PKC活化则通过诱导NF-κB通路的磷酸化激活,进而抑制UGT1A1靶基因的表达。2、UA和OA可通过抑制PKC/NF-κB通路的活化进而诱导UGT1A1靶基因的表达,但这并不是其诱导UAT1A1表达的唯一机制。