目的:乳腺癌居女性恶性肿瘤发病率的首位。而乳腺癌干细胞则是导致恶性乳腺肿瘤复发、转移、耐药的罪魁祸首。表观遗传学因子组蛋白H3K9甲基转移酶SETDB2在急性淋巴细胞白血病中调节细胞周期的紊乱并在胃癌中显示致癌活性。但在乳腺癌干细胞中,SETDB2的功能尚未有报道,我们通过前期筛选发现SETDB2在乳腺癌干细胞中表达升高,提示其可能在乳腺癌干细胞调控中发挥作用,因此我们想探讨SETDB2在乳腺癌干细胞中的新功能及调控机制。方法:1、利用流式细胞仪检测SETDB2敲低对ALDH+(乙醛脱氢酶)细胞群体的百分比的影响;2、微球体形成实验分析SETDB2对乳腺癌细胞的成球能力的影响;3、在SETDB2敲低稳系中恢复SETDB2的表达,通过微球体形成实验进一步分析SETDB2对乳腺癌细胞的成球能力的影响;4、细胞增殖实验CCK8和平板克隆分析SETDB2对乳腺癌细胞增殖能力的影响;5、在裸鼠乳腺脂肪垫原位接种SETDB2敲低稳系细胞,观察SETDB2对乳腺肿瘤生长和肿瘤起始能力的影响;6、蛋白印迹电泳检测SETDB2敲低对细胞总体的组蛋白H3K9甲基化水平、△Np63α蛋白水平的影响;7、免疫共沉淀检测SETDB2与△Np63α的相互作用;8、利用蛋白质合成抑制剂CHX和蛋白酶体抑制剂MG132处理乳腺癌细胞,分析SETDB2对△Np63α蛋白稳定性的影响。结果:1、敲低SETDB2减少了乳腺癌细胞系中ALDH+群体的比例,乳腺癌细胞微球体形成能力减弱;2、SETDB2的敲低减弱了裸鼠乳腺原位肿瘤生长能力和致瘤能力;3、恢复SETDB2的表达能够拯救因敲低SETDB2引起的微球体形成能力的减弱;4、细胞增殖实验结果显示,敲低SETDB2对乳腺癌细胞增殖能力并无显著影响;5、敲低SETDB2不影响乳腺癌细胞系总体的H3K9me3甲基化水平;6、RNA-Seq分析发现SETDB2的敲低下调了 Hedgehog信号通路相关基因PTCH 1,GLI2,CXCR4 的 mRNA 水平;7.敲低 SETDB2 降低了 △Np63α 蛋白水平;8、免疫共沉淀实验表明SETDB2和△Np63α存在相互作用;8、蛋白稳定性实验表明SETDB2能够稳定△Np63α蛋白水平保护其不被蛋白酶体降解。结论:SETDB2通过与△Np63α相互作用并维持△Np63α蛋白稳定性,参与调控He dgehog信号通路,促进乳腺癌干细胞微球体形成和乳腺肿瘤的发生和生长。我们的研究揭示了 SETDB2在乳腺癌干细胞干性维持中的新功能。图[12]表[26]参[63]