【摘 要】
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细胞自噬是植物体内极其重要的功能之一。拟南芥细胞自噬相关基因的研究对深入了解细胞自噬具有重要意义。Atg8是细胞自噬的一个重要蛋白,Atg8融合GFP是检测植物中细胞自噬的重要途径。在前期的研究中,我们以AtAtg8e为诱饵蛋白,通过酵母双杂交实验,从拟南芥cDNA文库筛选得到了35个与AtAtg8e互作的蛋白。本研究采用荧光素互补技术(LCI)进一步探讨这些蛋白在烟草中与AtAtg8的互作关系。
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细胞自噬是植物体内极其重要的功能之一。拟南芥细胞自噬相关基因的研究对深入了解细胞自噬具有重要意义。Atg8是细胞自噬的一个重要蛋白,Atg8融合GFP是检测植物中细胞自噬的重要途径。在前期的研究中,我们以AtAtg8e为诱饵蛋白,通过酵母双杂交实验,从拟南芥cDNA文库筛选得到了35个与AtAtg8e互作的蛋白。本研究采用荧光素互补技术(LCI)进一步探讨这些蛋白在烟草中与AtAtg8的互作关系。首先构建了LCI所需的载体:35个候选基因以及AtAtg8的N-LUC载体;AtAtg8 (a-i)等9个基因的C-LUC载体。随后进行LCI检测,发现在检测的35个候选蛋白中,只有2个蛋白(E58和E121)荧光强烈;7个蛋白(E13、E16、E20、E52、E89、E116和E134)荧光强度中等;大部分的蛋白没有荧光或信号很弱。说明E58和E121蛋白在烟草体内与AtAtg8e互作强烈;E13、E16、E20、E52、E89、E116和E134蛋白与AtAtg8e有互作,但相对较弱。另外,发现E58和E121蛋白与9个AtAtg8蛋白互作强度有差异,说明AtAtg8家族中各成员的功能可能有所不同。
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