可卡因安非他明调节转录肽相互作用蛋白的筛选

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[摘要]目的:寻找可卡因安非他明调节转录肽(CART)受体或与其相互作用的蛋白。方法:建立大鼠脑cDNA文库,以CART41-102为诱饵,应用细菌双杂交方法筛选CART的相互作用蛋白。将得到的阳性结果进行DNA测序,进一步根据生物信息学方法分析阳性结果。结果:成功构建大鼠脑cDNA文库及诱饵质粒pBT-CART。文库容量为3.37×106,重组率98.5%。筛选约5.01×106个共转化克隆,得到阳性克隆125个,证实为阳性克隆93个,送测序93个。经生物信息学方法分析得到stathmin等6个可能与CART相互作用的蛋白,并得到可能与CART相互作用的未知新蛋白的DNA序列,它们与22个已知膜蛋白或受体有短的极相似片段。结论:细菌双杂交是一种鉴定蛋白质之间相互作用的简单而有效的方法。CART可能与stathmin等6个已知蛋白相互作用,并与22未知蛋白相互作用,这些未知蛋白与22个膜蛋白或受体有短的相似保守结构。
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