酵母生物转化生产2-苯乙醇的研究

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2-苯乙醇(又称β-苯乙醇)是一种具有玫瑰花香的芳香醇,广泛应用于医药、食品、化妆品、烟草和日化用品等产业中,随着天然2-苯乙醇市场需求量的不断增加,利用酵母生物转化生产天然2-苯乙醇具有广阔的市场前景和应用价值。本课题对实验室保藏12株工业酵母转化生产2-苯乙醇的能力进行测定,筛选到2-苯乙醇高产菌两株,通过基于5.8S rDNA-ITS区域的酶切片段长度多态性(RFLP)分析进行菌种鉴定为Saccharomyces cerevisiae AS 2.516和Saccharomyces cerevisiae GER,其2-苯乙醇产量分别为1.007g/L和1.14g/L。创新性建立2-苯乙醇含量快速检测方法——测定氯仿抽提相吸光度。比较12株工业酵母发酵液的快速检测和HPLC检测结果发现,该方法能准确反映发酵液中2-苯乙醇的含量,对S.cerevisiae AS 2.516测定相对误差仅为1.69%。对S.cerevisiae AS 2.516发酵培养基和培养条件运用均匀设计进行优化,摇瓶发酵获得1.8g╱L 2-苯乙醇,进一步优化培养基中磷酸二氢钾的浓度和发酵时间,2-苯乙醇产量提高至2.13g/L,摩尔转化率为57.6%。对S.cerevisiae AS 2.516进行紫外诱变育种,利用快速检测方法筛选167株突变株,获得一株2-苯乙醇高产菌S.cerevisiae CWY132,经优化后培养基发酵获得2-苯乙醇3.52g/L,其转化率高达95.3%。运用原位产物抽提技术增加L-苯丙氨酸的投入和2-苯乙醇的产量。摇瓶培养中,10g/L L-苯丙氨酸,聚丙二醇1500为抽提介质,2-苯乙醇产量最高达5.35 g/L,转化率72.3%;发酵罐试验中,10g/LL-苯丙氨酸,聚丙二醇1500为抽提介质,发酵42h后2-苯乙醇产量为5.71g/L,转化率77.2%。
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