自1989年丙型肝炎(HCV)的分离鉴定以来，人们在HCV的抗体血清学诊断方面取得了很大的进展，与第一代丙型肝炎ELISA试剂相比，第二代抗体检测试剂因其敏感性和特异性的提高而倍受推广。尽管如此，第二代检测试剂在对HCV感染的病人进行检测时，依然存在假阴性的现象。为克服这些问题，提高对丙型肝炎患者检测的敏感性和特异性，本实验采用基因工程的手段，开发了一种具多表位嵌合抗原(MECA)蛋白进行血清HCV抗体检测，该蛋白为丙型肝炎基因组中具有主要优势表面抗原的NS5，NS3和Core基因产物。 首先，本文通过PCR的方法从HCV基因组中分别克隆了编码NS5，NS3和Core基因，连接后克隆到表达载体pThiohis-A中，基因测序显示带有目的基因的融合载体开放阅读框与表达载体pThiohis-A的trxA阅读框完全一致。转入大肠杆菌，37℃培养后0.5mmol/LIPTG诱导6h可获得高表达量的目的蛋白，其分子量大小刚好等于TrxA与嵌合抗原(MECA)之和，SDS-PAGE分析表明诱导后目的蛋白HCV/T-MECA产量为菌体总量的26％。 进一步的研究发现，HCV/T-MECA蛋白主要以包涵体形式存在于大肠杆菌胞内。纯化过程中发现，溶菌酶消化辅以超声破碎能高效获得包涵体，离心后采用两种不同方法洗涤包涵体均能除去大部分的杂质，8mol/L尿素溶解后的HCV/T-MECA融合蛋白纯度在45％以上，经Ni2+螯合层析后，重组蛋白的SDS-PAGE仅在72kD处显示单一蛋白条带，扫描分析其纯度在95％以上，West-blot进一步证实该条带确为HCV/T-MECA蛋白纯化后产物。ELISA分析显示，纯化后产物与血清中HCV抗体表现出很强反应性，并且，该嵌合抗原还显示了较高的敏感性和特异性，与商业化抗人HCV抗体ELISA试剂盒相比，也表现出了较好的应用前景。