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背景灰毡毛忍冬作为《中国药典》2010年版一部中山银花项下收载品种,是历史悠久的药食两用药材,具有抑菌、抗炎、抗病毒、保肝、抗氧化等作用。秀山县银花现有种植面积已达30万亩,为当地山区农民带来了良好的经济效益。为提高其市场附加值和抗风险能力,延长产业链,研发以秀山银花为主的深加工产品,本项目研制以灰毡毛忍冬为主要原料的中药保健食品—银天颗粒。目的研究银天颗粒的提取工艺、成型工艺、对其质量及稳定性进行考察,并观察其对小鼠实验性肝损伤的保护作用,为将银天颗粒开发成为中药保健食品奠定基础。方法1.提取工艺研究：根据处方中药物有效成分的理化性质,选择混煎水提法提取,并采用正交实验设计方法,以浸膏得率、浸膏的绿原酸含量为指标,优化最佳提取工艺。2.成型工艺研究：用单因素试验选择填充剂、润湿剂、粘合剂的种类,并初步筛选其用量范围：采用正交设计法对单因素试验结果进行优化,以口感、粒度、溶化性等指标进行综合考察评价,从而筛选出最佳成型工艺。3.质量标准及稳定性考察：(1)鉴别：采用TLC对处方中的山银花、栀子、药材A进行定性鉴别。(2)检查：按照《中国药典》2010年版一部附录Ⅰ制剂通则ⅠC颗粒剂项下的规定制定相关检查项目,包括粒度、水分、溶化性、装量差异等。(3)含量测定：采用HPLC法对银天颗粒中的绿原酸和栀子苷的含量进行测定,确定其含量限度。(4)稳定性考察：通过影响因素试验及加速试验考察银天颗粒的稳定性。4.银天颗粒对小鼠实验性肝损伤的保护作用研究：(1)对小鼠CCl4急性肝损伤的保护作用：选用昆明种小鼠,均分为6组,即正常、模型、联苯双酯和银天颗粒6.6 g·kg-1、13.2 g·kg-1、26.4 g·kg-1组。连续灌胃给药14 d天后按20 mL·kg-1体重的剂量灌胃给予0.10%CCl4橄榄油致小鼠急性肝损伤,禁食不禁水16 h后,测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,并对肝组织进行病理切片。(2)对小鼠急性酒精肝损伤的保护作用：选用昆明种小鼠,均分为6组,即正常、模型、联苯双酯和银天颗粒6.6 g·kg-1、13.2 g·kg-1、26.4 g·kg-1组。连续灌胃给药14 d,每次灌胃给药2 h后,除正常组外按14 mL·kg-1体重的剂量灌胃给予灌胃50%乙醇。末次灌胃50%乙醇后,禁食不禁水12 h,测定小鼠血清中ALT、AST活性,肝匀浆中SOD活性及丙二醛MDA含量。结果1.提取工艺研究：称取处方量的灰毡毛忍冬、栀子、药材A,粉碎过40目筛,加15倍量的水,在70℃的温度下煎煮3次,每次1 h。合并滤液,真空干燥得浸膏。其浸膏得率、浸膏中绿原酸含量分别为59.01%、11.18%。2.成型工艺研究：将浓缩液减压真空干燥,粉碎成浸膏粉。加入适量的淀粉、糊精、PVP、甜菊糖混匀,湿法制粒,在60℃下干燥45 min,整粒,密封包装。3.质量标准及稳定性考察：参照药典拟定质量标准草案,包括：(1)鉴别：采用TLC对颗粒剂及处方中的药材进行定性鉴别。(2)检查：粒度<15%、水分含量<6%、溶化性、装量差异均符合《中国药典》2010年版一部附录Ⅰ制剂通则ⅠC颗粒剂项下的相关规定。(3)含量检测项目以绿原酸计,不得低于10.00 mg·g-1(4)稳定性考察：通过影响因素试验考察,得出银天颗粒在生产、包装、贮存时应注意避免强光长时间照射。参考加速试验的结果表明银天颗粒在加速试验期间内,各项指标均符合规定,稳定性良好。4.银天颗粒对小鼠实验性肝损伤的保护作用：(1)对小鼠CCl4急性肝损伤的保护作用：与正常组相比,模型组小鼠血清中AST、ALT的活性明显升高,肝组织中SOD活性降低,MDA含量升高,均具有极显著差异(P<0.01),显示造模成功。与模型对照组相比,银天颗粒6.6 g·kg-1、13.2 g·kg-1、26.4 g·kg-1组能显著降低CCl4急性肝损伤小鼠血清中AST、ALT的活性(P<0.01)。银天颗粒13.2 g·kg-1、26.4 g·kg-1能显著升高小鼠肝组织中SOD活性(P<0.01),显著降低MDA含量(P<0.01)。实验结果表明银天颗粒对小鼠CCl4急性肝损伤具有保护作用。(2)对小鼠急性酒精肝损伤的保护作用：与正常组相比,模型组小鼠血清中AST、ALT的活性明显升高,肝组织中SOD活性降低,MDA含量升高,均具有极显著差异(P<0.01),显示造模成功。与模型对照组相比,银天颗粒6.6 g·kg-113.2 g·kg-1、26.4 g·kg-1组能极显著降低小鼠血清中AST活性(P<0.01)；银天颗粒13.2 g·kg-1、26.4 g·kg-1组能显著降低小鼠血清中ALT活性(P<0.05或P<0.01)；银天颗粒13.2 g·kg-1、26.4 g·kg-1组能显著升高小鼠肝组织中SOD活性(P<0.01)；银天颗粒6.6 g·kg-1、13.2 g·kg-1、26.4 g·kg-1组能显著降低MDA含量(P<0.05或P<0.01)。实验结果表明银天颗粒对小鼠急性酒精性肝损伤具有保护作用。结论称取处方量的灰毡毛忍冬、栀子、药材A,加15倍量的水,70℃煎煮3次,每次1 h,提取液浓缩,干燥,粉碎,加入5倍量的填充剂和5%的PVP,混匀,喷洒60%乙醇湿法制粒,干燥,过筛,即得银天颗粒。按此工艺制备的银天颗粒质量可控,稳定性良好。银天颗粒对小鼠CCl4急性肝损伤及急性酒精肝损伤具有保护作用。