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‘精诚’是近年来刚从日本引进的单头切花白菊新品种,具有耐寒、供花期在清明节前后的特点,适合在我省高海拔山区种植,可以填补白扇’和‘神马’的市场空挡期,针对目前‘精诚’优质种苗的短缺问题,本研究以‘精诚’原种植株的插穗为材料,建立组培快繁体系,为加速‘精诚’品种产业化提供优质种苗和技术支持,具有重要的理论意义和实践价值。针对我省单头切花白菊主栽品种‘白扇’和‘神马’生产中存在的侧芽多、花瓣数减少、花径变小、品种用途单一等问题,本研究以‘白扇’原种插穗为材料进行EMS化学诱变处理,以‘神马’原种插穗为材料进行60Co-γ辐射诱变处理,找出不长侧芽或侧芽少的、花瓣数增多的优良单株;并采用ISSR分子标记技术,对所筛选出的优良单株进行遗传相似性分析;所选出的优良单株,为‘白扇’和‘神马’优良品种的选育提供新的种质或原始材料,对减少抹芽成本、提高‘白扇’和‘神马’的观赏价值和经济效益,具有重要的实践价值。本研究主要结果如下:1.建立了‘精诚’组培快繁体系(1)无菌系的建立:以‘精诚’原种插穗为材料,以0.1%HgCl2为表面消毒剂,以顶芽和带腋芽茎段为外植体进行初代培养,诱导了无菌植株,试验结果表明:0.1%HgCl2的最佳消毒时间5 min,顶芽比带腋芽更适合作为初代培养的外植体,初代培养最佳培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,平均有效芽诱导数为5.87。(2)芽苗的继代增殖:以初代培养诱导的无菌苗带腋芽茎段、叶片切段和叶柄为外植体,接种到不同浓度激素组合的MS培养基中,诱导不定芽或丛生芽,试验结果表明:带腋芽茎段最佳的增殖培养基为MS+1.0 mg/L6-BA+0.3mg/LNAA,增殖系数为6.92;叶片切段的最佳增殖培养基为:MS+1.0 mg/L6-BA+0.3 mg/LNAA,增殖系数为3.59;叶柄的最佳增殖培养基为:MS+1.5mg/L6-BA+0.15mg/LNAA,增殖系数为0.49。(3)无菌苗的生根培养:将增殖培养中长势一致的无根苗剪成长为3.5 cm左右的插穗,接种于不同浓度的NAA或IBA的1/2MS培养基进行诱导生根,试验结果表明:不同浓度的NAA或IBA均能诱导无根苗生根,生根率达100%,随着NAA或IBA浓度增加,生根数和根的粗度增加,IBA和NAA均为0.5mg/L时,IBA诱导生根的效果比NAA更好,因此,1/2MS+0.35 mg/LIBA为最适的生根培养基。(4)生根苗的炼苗和移栽:生根苗经过不同时间的炼苗,移栽到不同种类和配比的基质中,试验结果表明:无根苗只需2d的炼苗,移栽成活率就可达100%,最佳的移栽基质为草炭土+蛭石=1:1。2.通过EMS化学诱变,获得‘白扇’的优良突变单株以EMS为诱变剂,浓度分别为0、0.05%、0.1%、0.2%、0.4%和0.6%,采用涂抹法处理‘白扇’原种幼苗,从突变的植株中,筛选侧芽少或无侧芽、花径大、花瓣数多的优良单株,试验结果表明:5个EMS浓度处理共获得13个优良突变单株,以0.05%和0.1%EMS诱导的优良突变单株分别为6株和7株,优良突变单株的主要表现分别为花径变大和花瓣数变多,当EMS浓度为0.2%时,植株死亡率为48.89%,没找到优良的突变单株,因此,EMS的最适处理浓度为0.1%。以EMS诱变获得的13个优良的突变单株为材料,应用ISSR分子标记技术,与原种植株进行遗传相似性分析,结果表明,‘白扇’原种和优良突变单株共扩增出128个条带,‘白扇’诱变植株的遗传相似系数介于0.563-0.836之间,设置伐值(GS)值为0.76时,可以把‘白扇’的14份材料分为6类,因此,经EMS诱变后得到的优良单株与原品种相比存在变异。3.通过60Co-γ辐射诱变,获得了‘神马’的优良突变单株用不同剂量(0、10Gy、20 Gy和30 Gy)的60Co-γ辐射处理‘神马’插穗,从突变植株的群体中,筛选无侧芽的优良突变单株,试验结果表明:60Co-γ辐射处理的植株均出现矮化突变,共获得5个无侧芽的优良突变单株,其中10 Gy和20Gy处理的分别获得3株和2株,优良突变单株表现为在花盘以下15cm无侧芽生长,因此,诱发无侧芽突变的最适辐射剂量为10 Gy。以60Co-γ辐射诱变获得的5个优良的突变单株为材料,应用ISSR分子标记技术,与原种植株进行遗传相似性分析,结果表明,‘神马’原种和优良突变单株共扩增出111个条带,‘神马’诱变植株的遗传相似系数介于0.622-0.811之间,设置伐值(GS)值为0.794时,可以把‘神马’的5份材料分为5类,因此,经60Co-γ辐射诱变后得到的优良单株与原品种相比存在变异。