H5亚型禽流感病毒不仅能够感染几乎所有禽类,以其高致病性及死亡率严重危害养禽业的发展,还突破了宿主的种属屏障,直接感染人类,严重威胁了人类的生命健康,对H5亚型禽流感病毒的快速检测十分重要。PCR方法已成为H5亚型禽流感病毒快速检测的一种常用手段,目前常采用纯的核酸或灭活的病毒作为PCR检测的质控品,存在稳定性及生物安全性等方面的缺陷。构建一个稳定的具有良好生物安全性的阳性质控品具有重要的意义。首先,利用Armored RNA技术将H5亚型禽流感病毒HA基因部分序列HAC克隆到能够表达耐核糖核酸酶的病毒样颗粒的表达载体上,转化大肠杆菌进行诱导表达。对得到的表达产物利用单双酶消化实验进行初步验证后,提取表达产物所包含的RNA进行RT-PCR,并利用透射电镜观察蔗糖密度梯度离心后的表达产物的形态,结果表明已成功制备含H5亚型禽流感病HA基因RNA片段的病毒样颗粒。该病毒样颗粒能够耐受核糖核酸酶的消化,具有良好的稳定性和生物安全性。其次,通过选择不同的培养基,OD值及IPTG诱导时间优化了病毒样颗粒的诱导表达条件。并根据MS2噬菌体前130bp UTR序列的分子调控机制对表达载体进行优化,进一步构建了pS1,pS2,pS3三个表达载体,提高了病毒样颗粒的产量。最后,以H5亚型禽流感病毒病毒样颗粒作为阳性标准品,通过均匀设计的实验方法优化了实时荧光PCR反应体系,并最终得到实时荧光PCR检测H5亚型禽流感病毒的阳性对照标准曲线,为H5亚型禽流感病毒的准确定量检测提供了基础。