论文部分内容阅读
研究背景有近15-25%结直肠癌病人表现为同时性肝转移,另有近50%病人在结直肠癌原发灶切除后2年出现异时性肝转移。近年来,综合治疗(手术为主)使结直肠癌肝转移的病人生存得到了显著提高,根治切除术后5年生存率可达50%左右。虽然已有学者提出用于预测可切除结肠癌肝转移预后的模型,但仍缺乏精准的术前评估,致使约40%的术前认为可切除的病人,因术前估计不足,施行不必要的“剖腹探查”。如何更好的术前评估结直肠癌肝转移病人引起了广泛重视。结直肠癌肝转移的发生除了与癌基因,抑癌基因异常表达或丢失有关,尚与“表观遗传学”(甲基化,乙酰化,非编码RNA调控)密切相关。已有综述表明,在肠癌肝转移发生过程中广泛涉及microRNA的调控。亦已发现相当数量的microRNA与此相关,已有学者称此类microRNA为"metastamiR".研究目的我们拟通过microRNA芯片高通量的分析与结直肠癌肝转移可能相关的microRNA标志物,并通过定量PCR(qRT-PCR)验证。对芯片发现与结直肠癌肝转移相关的microRNA494进行深入研究,明确microRNA494促进肝转移发生的机制。采用meta分析明确PET-CT的应用能否在传统的影像学检查的基础上为结肠癌肝转移病人术前评估提供更多的价值。采用SEER数据分析淋巴结状态对可切除转移性结直肠癌预后的影响。方法1、结直肠癌肝转移发生相关的microRNA标记物筛选获取31对结直肠癌“肝转移”与“无肝转移”的原发灶新鲜组织,提取total RNA.采用Agilent芯片分析两组间microRNA表达和基因表达的差异。分析与结直肠肝转移相关的microRNA谱及其调控的靶基因。2、结直肠癌肝转移发生相关的microRNA临床验证选取126个结直肠癌病人,结合文献报道结果,采用石蜡标本对miR15b, miR19a,miR20a, miR181a,miR181d,miR223,miR4947个microRNA进行验证。回顾分析其与肝转移发生与否关系,并进一步明确其用于预测结直肠癌预后的价值。3、miR494引起结直肠癌肝转移的分子机制筛选出miR494低表达的Lovo细胞株。体外构建miR494过表达的miR494-Lovo细胞株,分析miR494对Lovo细胞功能影响。进一步通过整合生物学分析,miR494可能作用靶点,引起肝转移的机制。4、淋巴结状态对可切除转移性结直肠癌预后的影响-基于SEER的分析从SEER数据库里,提取了在2004-2007年期间原发灶及转移灶均接受了手术治疗的2007例转移性结直肠癌病人的数据。采用单因素及多因素分析原发灶淋巴结转移状况对预后的影响。5、PET用于可切除结直肠癌肝转移病人术前评估的价值-meta分析共筛选了213相关的文献,入组了13篇文献进行meta分析。对PET用于诊断肝内和肝外转移的准确性,改变治疗率及无效手术率进行了meta分析,用于明确PET在可切除结直肠癌肝转移的病人中应用的价值。结果芯片分析结果显示：在结直肠癌肝转移与无肝转移两个组间有16个差异表达的microRNA。其中miR15b,miR223,miR19a在肝转移组表达下降,miR494在肝转移表达上升,均可以进一步通过石蜡组织qRT-PCR得到验证。并表明miR494的高表达与预后差相关。体外验证表明miR494可引起细胞周期改变(S期比例增加),侵袭能力的增加。对于可切除转移性结直肠癌,淋巴结转移(无论是转移数目还是转移率)均与预后差密切相关。对于传统影像学检查评估为的可切除的结直肠癌肝转移的病人,加用PET可以提高肝外转移灶的灵敏度,减少不必要的“剖腹探查”术。结论和创新点：1、miR15b,miR223,miR19a的低表达及miR494高表达均与肠癌肝转移的发生有关。同时miR494高表达还与结直肠癌预后差相关。2、miR494可引起Lovo细胞株侵袭能力增加,有可能成为区分可切除结直肠癌肝转移新的标志物。3、淋巴结状态和PET-CT有助于术前更为精确的评估可切除结直肠癌肝转移的病人。