【摘 要】
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第一部分利用生物信息学方法鉴定免疫细胞在钙化主动脉瓣膜中浸润的程度目的探索CAVD发展过程中免疫细胞对钙化进展的影响。方法利用GEO数据库,下载与主动脉瓣膜钙化相关的免疫细胞浸润基因数据,从获得的芯片注释文件分离出患者对应的探针矩阵,利用系统生物学工具CIBERSORT对大量基因表达数据进行反卷积复杂算法,通过基因表达微阵列数据的解卷积对免疫细胞进行分析。获得钙化主动脉瓣膜组织和正常瓣膜组织相对应
【基金项目】
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项目名称:NKX2.5基因与壮族先天性心脏病的关系,项目合同编号:2016GXNSFAA380256,项目来源:广西自然科学基金,项目起止时间:2016.09-2019.03
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第一部分利用生物信息学方法鉴定免疫细胞在钙化主动脉瓣膜中浸润的程度目的探索CAVD发展过程中免疫细胞对钙化进展的影响。方法利用GEO数据库,下载与主动脉瓣膜钙化相关的免疫细胞浸润基因数据,从获得的芯片注释文件分离出患者对应的探针矩阵,利用系统生物学工具CIBERSORT对大量基因表达数据进行反卷积复杂算法,通过基因表达微阵列数据的解卷积对免疫细胞进行分析。获得钙化主动脉瓣膜组织和正常瓣膜组织相对应的22种免疫细胞浸润矩阵,筛选得到在钙化瓣膜与正常瓣膜组织免疫细胞对比的相关三组数据集GSE51472、GSE12644和GSE83453,通过利用Wilcoxon非参数检验对三组样本进行筛选,获得差异表达的免疫细胞,以(p<0.05)具有差异性,筛选具有表达意义的样本。结果数据集GSE51472得出浆细胞、巨噬细胞M0、巨噬细胞M2、调节T细胞(Treg)、γδT细胞和自然杀伤激活细胞均具有表达差异性,但钙化瓣膜组织的单核细胞含量低于正常瓣膜组织。数据集GSE12644得出单核细胞、巨噬细胞M0和自然杀伤激活细胞具有表达差异。数据集GSE83453得出单核细胞和树突静止细胞表达具有差异性。同时利用x CELL算法重叠鉴定免疫细胞的差异表达,以(p<0.05)具有差异性。结果发现,单核细胞在三组数据集中的表达,其中两组具有差异性,三组钙化瓣膜组织单核细胞的含量均低于正常瓣膜组织,均呈下降趋势,表明单核细胞可能参与主动脉瓣膜钙化的进展过程。结论研究结果发现在瓣膜钙化的进展过程中免疫细胞发挥了作用,其中单核细胞的含量在瓣膜组织中的改变具有差异性,单核细胞对瓣膜钙化的进展可能提供一定的研究基础。第二部分对数据集单核细胞差异表达的结果验证目的收集人体瓣膜组织,验证在钙化瓣膜组织中单核细胞的浸润情况是否与GEO数据集分析结果一致。通过Real-time PCR、免疫组织化学方法检测单核细胞在瓣膜组织的浸润表达情况,分析单核细胞在瓣膜钙化进展中产生的影响。方法收集7例钙化瓣膜组织和7例正常瓣膜组织,对数据集中表达具有差异性的单核细胞进行验证,验证单核细胞的特异亚型CD14单核细胞和CD16单核细胞在钙化瓣膜和正常瓣膜的表达水平,检测单核细胞在钙化瓣膜组织的含量,利用Real-time PCR检测CD14单核细胞和CD16单核细胞在钙化瓣膜组织和正常瓣膜组织中的表达,免疫组织化学检测对单核细胞染色,观察在钙化瓣膜组和正常瓣膜组的浸润表达情况。为研究单核细胞对CAVD的影响提供理论基础。同时,结合患者的临床信息,分析不同的临床各项指标对主动脉瓣膜钙化进展的影响。结果对瓣膜组织定量得到,在钙化瓣膜组织中得到CD14单核细胞的表达量均低于正常瓣膜组织,与第一部分免疫细胞浸润得到的单核细胞在钙化组低于正常组浸润表达结果相符合,CD14单核细胞主要参与瓣膜钙化的进展,含量越低瓣膜钙化程度越严重。结论CD14单核细胞可能与CAVD的钙化进展有关,正常瓣膜组织单核细胞的浸润密度明显高于钙化瓣膜组织的浸润密度。而CD16单核细胞在钙化瓣膜中的表达与正常瓣膜组织无明显差异性。
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