论文部分内容阅读
背景:帕金森病(PD)是一种神经退行性疾病,其特征是受影响个体大脑内特定神经元的进行性退化。帕金森病的发病机制目前尚不清楚,小胶质细胞介导的神经炎症及氧化应激与线粒体功能障碍在多巴胺神经元退行性病变过程中被认为发挥重要作用。氧化应激与线粒体功能障碍会直接影响能量代谢,最终会影响小胶质细胞吞噬异常蛋白的作用,从而损害多巴胺能神经元。很多研究证实司来吉兰具有抗氧化应激、保护线粒体功能、减少α-突触核蛋白的聚集,但目前尚无司来吉兰对神经系统小胶质细胞保护作用的体外实验。目的:初步阐明司来吉兰在线粒体氧化应激水平对BV-2细胞凋亡过程的作用。方法:1.用不同浓度的3-NP(2 mM、3 mM、4 mM)作用于BV-2细胞,MTT法检测细胞增殖活性,计算细胞生长抑制率,选择细胞生长抑制率在50%左右的3-NP浓度建立小胶质细胞氧化应激损伤模型。2.司来吉兰单独作用于BV-2细胞,设置浓度梯度依次为100μM、150μM、200μM、250μM、300μM、400μM、500μM、900μM、1000μM,检测司来吉兰在一定浓度范围内对BV2细胞的生长抑制率的影响。3.根据前两次实验所筛选出的3-NP浓度及司来吉兰浓度共培养,用MTT法检测司来吉兰对3-NP损伤BV-2细胞的干预作用。4.用免疫组化法检测各组Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达情况。5.用TUNEL法检测各组Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达情况。6.用流式细胞术检测各组Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达情况。结果:1.3-NP对BV2细胞的毒性作用24hMTT结果显示:不同浓度的3-NP均可降低BV2细胞存活率并呈浓度依赖性。在3-NP浓度为3mM时,细胞生长抑制率为47.50±0.73%。2.浓度依次为100μM、150μM、200μM、250μM、300μM、400μM、500μM、900μM、1000μM的盐酸司来吉兰溶液单独作用于BV2细胞MTT结果显示:在司来吉兰在一定浓度范围内对BV2细胞的生长抑制率无明显影响,只有当浓度大于900μM时,司来吉兰可对BV-2细胞的生长产生抑制作用。3.浓度为100μM、200μM的盐酸司来吉兰对3-NP损伤细胞共培养后MTT结果显示:盐酸司来吉兰可明显干预3-NP对BV2细胞的生长抑制作用(P<0.05)。4.免疫组化结果显示:司来吉兰200μM可明显减低BV-2细胞相关凋亡蛋白Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达量(P<0.01)5.TUNEL法结果显示:3-NP终浓度3mM可以导致BV-2细胞凋亡,司来吉兰200μM可以有效保护BV-2细胞(P<0.01)6.流式细胞术结果显示:司来吉兰200μM与3-NP-3mM同时作用后,可以明显降低BV2细胞的凋亡率。结论:1.将小鼠BV-2细胞暴露于浓度为3mM的3-NP溶液中可成功诱导小胶质细胞氧化应激损伤模型。2.司来吉兰预处理可明显降低3-NP损伤后BV-2细胞的活性,减少细胞凋亡。3.司来吉兰可通过线粒体途径调控3-NP诱导BV-2细胞氧化应激损伤所致的凋亡。