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目的 探讨趋化因子CXCR3变体(CXCR3-A和CXCR3-B)的表达及其在结直肠癌中的功能。明确其在结直肠癌发生、发展中的调节方式,为寻找新的靶点奠定基础。方法 利用免疫组织化学法(IHC-P)、蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测CXCR3-A和CXCR3-B在结直肠癌组织及细胞中的表达。利用CCK-8(Cell Counting Kit 8)、Transwell实验、划痕实验分析CXCR3-A和CXCR3-B干预后细胞的增殖、浸润及迁移能力,利用裸鼠皮下成瘤实验分析CXCR3-A、CXCR3-B对结肠癌细胞成瘤能力的影响,并利用免疫组织化学法检测成瘤后组织中Ki67的表达。结果1.免疫组织化学实验检测50个CRC样本(同时取该标本的≥5cm的癌旁组织),结果显示,癌组织中CXCR3-A的表达明显高于癌旁组织(P<0.001),而CXCR3-B的表达水平在癌旁组织中显著高于癌组织(P<0.001)。临床病理因素分析发现,CXCR3-A、CXCR3-B均与结直肠癌分化、分期和转移存在一定的关系(P<0.001),而与患者肿瘤部位等无关(P>0.05),同时,CXCR3-A随着TNM分期的变化表达增强,而CXCR3-B降低。2.Western-blot实验显示NCM460(正常肠上皮细胞)、HCT116(原位结肠癌细胞)、LS174T(原位结肠癌细胞)、SW480(原位结肠癌细胞)、SW620(结肠癌淋巴结转移细胞)、LOVO细胞系中CXCR3-A在结肠癌淋巴结转移细胞SW620(P<0.001)、LOVO(P<0.001)中的表达高于原位结肠癌细胞HCT116(P<0.01)、LS174T(P<0.01)、SW480(P<0.01)和正常肠上皮细胞NCM460。而CXCR3-B在正常结肠上皮细胞中表达较癌及转移癌细胞中高,差异有统计学意义。3.CCK-8增殖实验显示过表达CXCR3-A促进HCT116和LOVO细胞增殖,当细胞生长到第二天时开始显示差异(P<0.05),最明显的差异出现在第三天(P<0.001)。过表达CXCR3-B显著抑制了HCT116和LOVO细胞的生长。此外,CXCR3-A和CXCR3-B对NCM460细胞增殖没有显著影响。CXCR3-A和CXCR3-B对细胞增殖显示出相反的作用。4.Transwell侵袭实验表明,过表达CXCR3-A能显著促进HCT116(P<0.01)和LOVO(P<0.001)细胞侵袭。过表达CXCR3-B对HCT116和LOVO细胞侵袭具有抑制作用,但抑制不明显。5.划痕实验显示过表达CXCR3-A促进了HCT116(P<0.001)和LOVO(P<0.001)细胞的迁移,CXCR3-A和CXCR3-B之间的比较在NCM460(P<0.001),HCT116(P<0.001)和LOVO(P<0.001)细胞中具有显著性差异。Transwell迁移实验与划痕实验结果一致。6.皮下成瘤实验显示,过表达CXCR3-A组肿瘤较对照组增大(P<0.01),而过表达CXCR3-B组肿瘤较对照组减小(P<0.01)。检测过表达CXCR3-A肿瘤组发现Ki67增殖能力高于对照组(P<0.001),而过表达CXCR3-B肿瘤组发现Ki67增殖能力低于对照组(P<0.001),表明CXCR3-A、CXCR3-B对肿瘤的增殖作用不同。7.过表达CXCR3-A竞争性的下调CXCR3-B的表达,过表达CXCR3-B竞争性的下调CXCR3-A的表达。在NCM460细胞系中过表达CXCR3-A后,我们检测到CXCR3-B下调,差异有统计学意义(P<0.001)。而在HCT116(P<0.001)和LOVO(P<0.01)细胞系中过表达CXCR3-B后,我们检测到CXCR3-A下调。结论趋化因子受体3(CXCR3)在结直肠癌(CRC)进展的不同分期中发挥的作用不同。CXCR3-A与CXCR3-B在结直肠癌中可能以一种竞争性的拮抗机制相互作用,在调节结直肠癌的进程中,CXCR3-A/CXCR3-B的平衡失调可能引起了CRC的增殖、浸润和迁移。