豆血红蛋白基因被认为是共生固氮的标志性基因，控制和保持类菌体的低氧环境，保护固氮酶活性。有研究表明豆血红蛋白还具有调节根瘤发育和固氮过程的重要功能，但其作用及调控机制尚未阐明。　　前期研究工作中，本室利用酵母双杂交技术，筛选获得了与Lb相互作用的候选靶蛋白LY-53。生物信息分析表明该蛋白包含两个功能域，tify domain和Divergent CCT motif。前者包含有锌指结构，常见于植物转录因子中，在拟南芥中研究较多，与多种调控功能相关；后者与核定位有关。　　本文通过RACE方法，进一步克隆了LY-53基因的cDNA全长，结果显示LY-53的cDNA全长1034bp，编码区717bp，编码238个氨基酸。利用构建截短突变体和酵母双杂交技术，确证了LY-53蛋白与Lb蛋白在酵母体内的相互作用，定位了二者发生蛋白互作的关键区域tify domain。通过目标蛋白表达纯化、pull-down实验技术，在体外验证了LY-53和Lb的相互作用。利用双分子荧光互补技术（BiFC）技术，在烟草植物细胞内进行了LY-53和Lb互作的亚细胞初步定位，结果显示两个蛋白在细胞膜和细胞质处互作，可以检测到明显的阳性荧光信号。　　利用Real-time PCR分析了LY-53基因的组织器官和时序表达特异性。结果显示：LY-53在紫云英接种华癸根瘤菌共生后的根、茎、根瘤中表达，在叶和不接种对照根中也有少量表达，说明LY-53是组成型表达，且在接种根中表达量最高；但AsB2510基因在根瘤中呈特异性表达特征。在根瘤中的时序表达特性分析显示LY-53与AsB2510的表达动态基本一致。　　本文还构建了针对LY-53基因进行超表达和RNAi的两个重组载体，为进一步检测分析LY-53蛋白在结瘤和固氮中的功能表型奠定了良好基础。