【摘 要】
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缩水甘油和缩水甘油酯是在精炼植物油脱臭步骤中形成的一种食品污染物,也存在于含有盐和脂肪的热加工食品中。摄入缩水甘油酯后可在胃肠道中水解为缩水甘油。缩水甘油可以穿过血脑屏障,广泛分布于血液、肝脏、甲状腺、脾脏、肾脏、骨骼肌和脂肪组织中,因此血管内皮细胞与缩水甘油不断接触,可能对人体产生不良影响。芹菜素（Apigenin,API）一种天然类黄酮,存在于各种蔬菜和水果中,具有多种生物活性,包括癌症、糖尿
【基金项目】
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国家自然科学基金青年项目（31901807）:典型膳食多酚对油脂热氧化产生的活性羰基化合物的抑制与消除机制； 国家自然科学基金面上项目（31871901）:亲水胶体对肉制品中有害杂环胺类化合物形成的抑制作用及机制；
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缩水甘油和缩水甘油酯是在精炼植物油脱臭步骤中形成的一种食品污染物,也存在于含有盐和脂肪的热加工食品中。摄入缩水甘油酯后可在胃肠道中水解为缩水甘油。缩水甘油可以穿过血脑屏障,广泛分布于血液、肝脏、甲状腺、脾脏、肾脏、骨骼肌和脂肪组织中,因此血管内皮细胞与缩水甘油不断接触,可能对人体产生不良影响。芹菜素（Apigenin,API）一种天然类黄酮,存在于各种蔬菜和水果中,具有多种生物活性,包括癌症、糖尿病、炎症和心血管疾病。芹菜素-7,4′-O-二辛酸酯（Apigenin-7,4′-O-dioctanoate,API-C8）是在大豆油中煎炸芹菜中提取的衍生物,与API相比,它具有更高的亲脂性和细胞抗氧化活性。因此本文以HUVECs作为血管内皮细胞模型,研究了缩水甘油对HUVECs的细胞毒性作用及其相关机制。还评估了API和API-C8对缩水甘油诱导的HUVECs细胞损伤的保护作用及其相关机制。具体实验方法和结果如下:（1）缩水甘油对HUVECs的细胞毒性作用:首先研究缩水甘油对HUVECs细胞存活率以及细胞周期的影响。结果证实缩水甘油刺激HUVECs 24小时,抑制HUVECs增殖,阻滞其周期G2/M期。接着研究缩水甘油是否诱导HUVECs凋亡和自噬,经缩水甘油处理24小时后,在荧光显微镜下观察经Hoechst 33342染色后细胞皱缩,染色质凝集;Western blot检测发现凋亡标志蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP含量随着缩水甘油浓度增加而显著性提高;流式细胞术检测发现细胞凋亡百分率随着缩水甘油浓度增加而显著性上升,基于以上结果表明缩水甘油诱导HUVECs凋亡。然后进一步研究缩水甘油是否诱导HUVECs自噬。经缩水甘油处理24小时后,在荧光显微镜下观察经MDC染色的自噬囊泡;Western blot检测自噬标志蛋白,LC3-II、Beclin-1蛋白含量随着缩水甘油浓度增加而显著性提高,SQSTM1/P62蛋白含量随着LC3-II蛋白含量增加而显著性下降;自噬抑制剂3-MA处理后抑制自噬的同时也能减弱凋亡,并且3-MA能够显著性提高缩水甘油处理下细胞存活率。结果表明缩水甘油可以诱导HUVECs自噬依赖性细胞凋亡。（2）缩水甘油对HUVECs细胞毒性作用机制:首先研究在ERK/JNK/p38激酶抑制剂的存在下,对比无激酶抑制剂处理组,细胞活力存活率显著性提高;ERK、JNK、p38磷酸化蛋白含量随着缩水甘油浓度增加而显著性提高。表明缩水甘油在HUVECs可以激活ERK/JNK/p38信号通路。进一步研究ERK/JNK/p38信号通路是否调控凋亡和自噬,在ERK/JNK/p38信号通路激酶抑制剂的存在下,分别检测自噬和凋亡相关蛋白含量,研究发现缩水甘油通过激活ERK/JNK/p38信号通路诱导HUVECs凋亡和自噬（3）API和API-C8对缩水甘油诱导HUVECs细胞毒性的保护作用及其机制:首先分别检测API和API-C8对HUVECs细胞存活率的影响,以及API和API-C8在缩水甘油存在下的细胞存活率,研究结果发现API和API-C8都可以显著性提高细胞存活率,并且发现API-C8效果更为显著。接着使用Western blot检测凋亡和自噬标志蛋白含量,研究结果发现API和API-C8都可以显著性减弱凋亡和自噬。最后研究结果发现API和API-C8在缩水甘油显著性激活ERK/JNK/p38信号通路。
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