目的 通过细菌培养分子生物学技术探讨人类原发性肝癌(PLC)中螺杆菌感染与相关基因的检测,为肝癌的致病机理和防治寻找有价值的实验和理论依据。 方法 1、选取48例PLC患者的肝癌组织为实验组,29例其他肝病患者肝组织和30例胃癌患者胃癌组织、20例结直肠癌、20例子宫肌瘤作对照组。采用聚合酶链反应(PCR)检测螺杆菌属16SrRNA基因、相关功能基因cagA和vacA,16SrRNA的扩增产物经Southern杂交确认,并将PCR产物进行测序及同源性比较。2、应用哥伦比亚培养基分离培养癌组织中的螺杆菌,对培养阳性标本进行染色、尿素酶检测鉴定,进一步检测16SrRNA、cagA和vacA基因。通过以上方法综合评价螺杆菌感染与PLC的相关性。 结果 1、肝癌组分离出5株螺杆菌,分离阳性率10.42%,胃癌组7株,分离阳性率23.33%。经革兰染色、尿素酶、16SrRNA基因检测、Southern杂交和序列测定证实为Hp感染。2、48例原发性肝癌标本中有29例检出螺杆菌属16SrRNA基因,阳性率为60.4%;30例胃癌标本有20例检出螺杆菌16SrRNA,阳性率为66.7%。其他对照组未扩增出16SrRNA基因。3、肝癌组相关功能基因有5例cagA基因阳性,胃癌组有2例cagA基因阳性,均未扩增出vacA基因。提示,Hp菌株的基因型多为Ⅱ型,而少数为Ⅰ型。 结论 1、PLC患者肝组织中存在螺杆菌感染且感染率较高。2、PLC患者肝组织中Hp菌株的基因型多为Ⅱ型,而少数为Ⅰ型。