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目的:初步探讨虫草素对佐剂诱导小鼠脚掌炎症的抗炎作用及用机制。方法:60只雌性KM小鼠,3-4周龄,随机分成6组,分别为空白对照组(Control)、生理盐水处理组(Model)、虫草素高(H-Cor)剂量组(20 mg/kg)、虫草素中(M-Cor)剂量组(10 mg/kg)、虫草素低(L-Cor)剂量组(5 mg/kg)、地塞米松阳性对照组(Dexa)。虫草素组给予不同剂量的虫草素溶液,阳性组给予地塞米松注射液(2 mg/kg),空白对照组与生理盐水组给予同等剂量的生理盐水。各小鼠均为腹腔注射给药,1次/d,连续给药14天。末次给药1h后,测量记录小鼠脚掌厚度。脚掌注射CFA佐剂,诱导小鼠足肿胀,建立炎症模型。分别在建立模型后的4h、测量8h、12h、24h、48h、72h拍照并测量小鼠右后脚掌厚度,观察肿胀度的变化;测量并计算小鼠脾脏及胸腺指数,并拍照记录;HE染色法观察小鼠炎症脚掌的病理变化情况;小鼠蛋白抗体芯片法检测炎症部位细胞因子的变化趋势,筛选出相关炎症因子含量的变化趋势;ELisa炎症小鼠血清及组织中TNF-a、IL-1β、Il-6、IFN-γ等细胞因子的含量变化;免疫组化法检测炎症部位巨噬细胞(F4/80)及T细胞(CD3~+)的聚集程度。结果:1.小鼠致炎脚掌肿胀度变化情况从拍照结果可以观察到Control组小鼠在0h之后6个时间点的脚掌肿胀变化无显著差异;与Control组相比,Model组脚掌肿胀度显著增加,模型复制后12 h脚掌肿胀达到高峰,72 h后肿胀程度仍然较明显无减轻症状;与0 h相比,模型复制后H-Cor、M-Cor处理组及Dexa处理组在12 h内小鼠脚掌肿胀并不明显,72 h后肿胀程度逐渐消退;与Model组比较,L-Cor处理组无明显差异,无明显抑制脚掌肿胀。2.小鼠免疫器官指数变化与Control组小鼠相比,Model处理组小鼠脾脏及胸腺明显肿大,脾脏及胸腺显著指数增加(P<0.05);但与Model组相比,M-Cor及Dexa处理组小鼠脾脏肿大程度受到抑制,脾脏指数显著降低(P<0.05),而H-Cor及L-Cor组与Model组比较无显著性差异。与Model组比较,Cor各处理组及Dexa处理组的胸腺指数都显著减小(P<0.05),并且Cor各处理组胸腺指数降低程度与Control组无显著差异;Dexa处理组胸腺及脾脏指数与Control组相比也没有明显差异。3.小鼠致炎脚掌的病理变化Control组小鼠脚组织正常,Model组脚掌组织肌肉明显损伤,组织内间隙变大,并且有大量的液泡存在;可见有淋巴细胞、单核细胞及少数散在分布的中性粒细胞浸润。与Model组相比,M-Cor处理组及Dexa处理组脚掌组织结构清晰,损伤程度较轻,组织间隙较规侧,无明显的液泡,炎症细胞无明显浸润,H-Cor处理组软组织结构轻微损伤,有较少的单核细胞聚集;L-Cor处理组与Model组比较无明显差异。4.小鼠炎症部位细胞因子变化趋势通过小鼠细胞因子抗体芯片检测小鼠炎症组织中细胞因子变化趋势,我们发现与Control相比,在Model组中可见MMP-1、IL-1、IL-3、IL-4、IL-6、IL-12、IL-13、IL-17、TNF-α、BLC、CCL11、CXCL1、CXCL9、MIP-1等都有明显升高的趋势;但是与Model组相比,M-Cor及Dexa处理组不仅明显抑制了促炎因子IL-3、IL-2、IL-6、IL-9、IL-13、TNF-α等的升高,同时也抑制了炎症趋化因子MCP-1、BLC、CD30、CCL11、CXCL9、MIP-α等的升高;与M-Cor相比,H-Cor及L-Cor处理组抑制效果不明显。5.ElISA法验证小鼠血清及组织中部分细胞因子的含量与Control组相比,Model组小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ等的含量明显增加(P<0.05);与Model组相比,H-Cor、M-Cor及Dexa处理组TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ的含量都明显降低(P<0.05);其中,M-Cor处理组明显低于H-Cor处理组(P<0.05)。在脚掌组织中,与Model组相比,仅有M-Cor、Dexa处理组IL-6、TNF-α的含量明显降低,L-Cor及H-Cor处理组与Model组相比无明显差异。6.小鼠免疫细胞的聚集情况与Control组相比,Model组及L-Cor处理组组织中巨噬细胞(F4/80)和T淋巴细胞(CD3~+T)阳性数量显著升高(P<0.05),并且两者阳性细胞数量并无显著差异;与Model组相比,H-Cor处理组、M-Cor处理组及Dexa处理组炎症组织中巨噬细胞和T淋巴细胞数量明显减少(P<0.05),其中M-Cor及Dexa处理组中的巨噬细胞阳性率与Control组相比无明显差异。结论:虫草素可以明显改善小鼠炎症部位病理反应,降低免疫器官指数,减轻炎性肿胀及脚掌的病理损伤。其机制可能是虫草素可以通过抑制小鼠血液中促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、IFN-γ等)的分泌、降低免疫器官指数以及减少致炎部位趋化因子(MCP-1、BLC、CD30、CCL11、MIP-α等)的方式来减少巨噬细胞、T细胞等疫细胞的聚集程度,最终抑制炎症部位中相关炎性细胞因子的释放,改善佐剂诱导的炎症反应。另外本研究的炎症模型与国际上研究类风湿关节炎(RA)的模型相似,因此,虫草素可能在RA等相关炎症疾病中发挥治疗作用。