siRNA使HIF-1α基因沉默抑制大鼠视网膜体外新生血管形成的实验研究

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目的探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity,ROP)发病中的作用,为ROP的基因治疗寻找新的靶点。方法将化学合成小分子干扰RNA(small interference RNA,SiRNA)用脂质体介导法转染大鼠视网膜血管内皮细胞,转染的细胞在含化学缺氧剂——二氯化钴(CoCl2)的培养基中培养8h;应用荧光定量聚合酶链反应和Western印迹技术检测转染后HIF-1αmRNA和蛋白的表达量,应用四甲基偶氮唑蓝比色法对细胞增殖活性进行检测分析。正态分布计量资料用均数±标准差(x±s)表示,比较2组间是否存在差异采用t检验。结果成功将siRNA转染大鼠视网膜血管内皮细胞,荧光定量聚合酶链反应技术检测显示,4条siRNA均能不同程度抑制HIF-1α的转录表达,siRNA1、siRNA2和siRNA4组HIF-1α mRNA分别降至空白对照组的16.20%、20.34%和30.49%,与阴性对照组(83.34%)之间差异有统计学意义(t分别为16.786、8.953和4.087,P均<0.05)。Western印迹技术显示,siRNA1和siRNA2转染的大鼠视网膜血管内皮细胞HIF-1α蛋白表达水平分别为0.496、0.654,明显低于空白对照组(3.402)和阴性对照组(3.510),差异有统计学意义(t分别为6.861、2.893、4.567和5.072,P均<0.05)。siRNA1和siRNA2组细胞增殖抑制率分别为49.50%和67.41%,明显高于阴性对照组(15.70%),差异有统计学意义(t分别为2.786和6.904,P<0.05)。结论化学合成的HIF-1α siRNA能有效抑制大鼠视网膜血管内皮细胞在缺氧条件下HIF-1α基因及蛋白的表达,从而降低细胞增殖活性。
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