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脑缺血再灌注损伤是一种复杂的病理生理过程，包括如钙超载、线粒体损伤、炎症反应及细胞凋亡等许多环节，是许多种损伤信号通路合力导致的。因此，深入地探讨脑梗死缺血/再灌注后的病理发生机制，有利于治疗脑梗死引起的脑神经损伤，提高脑梗死患者的临床疗效。 神经节苷脂(gangliosides)是一种膜糖脂，含有唾液酸，是组成细胞膜的一种脂类成分，约占细胞膜总脂类的5％-10％。神经节苷脂GM1是哺乳类神经节苷脂的主要种类，脑灰质中含量最高，主要分布于细胞膜的外侧。研究发现，GM1能够激活C6神经胶质瘤细胞膜上TrkA受体，防止谷氨酸兴奋毒作用引起的凋亡，还能够与神经营养因子(NGF)协同作用，促进NGF诱导的Trk受体的磷酸化。另有研究发现，在GM1缺失的NG-CR细胞膜上Trk受体不表达，而且NGF也不能诱导其磷酸化，提示GM1是Trk受体正常表达和发挥功能所必须的。研究证实，脑缺血再灌注损伤后，GM1能够调节损伤部位神经细胞内Ca2+平衡、减轻兴奋性氨基酸的损伤、降低炎症反应和对抗一氧化氮合成酶(iNOS)和一氧化氮(NO)上升等过程中发挥着重要作用。 Kinase D-interacting substrate of220kDa(Kidins220)，又称作ankyrin repeat-rich membrane spanning protein(ARMS)，是一个跨膜支架蛋白，属大蛋白，包含大量的蛋白连接区域，与三种Trk受体和P75受体通过跨膜区域相互作用。ARMS的作用之一是招募蛋白或受体酶作用底物，ARMS作为蛋白激酶D作用底物，是一种新发现的Trk受体酪氨酸激酶下游蛋白。ARMS经常与Trk和P75共表达形成三元复合物，是唯一的与两种受体相联系的膜蛋白。ARMS被认为是神经营养因子信号通路中的一种重要的信号分子，ARMS与NGF-TrkA相结合激活下游的酶，ARMS上特异性的酪氨酸残基促进衔接蛋白CrkL与C3G结合，从而激活Rap1，而且，ARMS作为一系列重要衔接蛋白的支架蛋白直接参与神经营养因子信号通路。但是，脑缺血再灌注损伤后，神经节苷脂能否通过调节ARMS与CrkL的表达减轻脑神经损伤是一个值得探讨的问题。 目的：本实验选取96只成年健康SD大鼠，雌雄不限，随机分为假手术组、神经节苷脂治疗组和缺血再灌注组。依据缺血后再灌注的不同时间点，GM1治疗组和I/R组再细分为6h、12h，24h、3d4个亚组。取各组大鼠海马，分别利用免疫组化方法和蛋白免疫印迹方法检测ARMS蛋白与CrkL蛋白的表达变化，探讨脑缺血再灌注损伤后GM1的神经保护作用机制。 方法:1、实验材料:(1)实验动物清洁级健康SD大鼠96只，雌雄不限，体重215-235g，购自中国医科大学实验动物中心。(2)主要试剂多克隆兔抗大鼠ARMS与CrkL抗体(Santa-Cruz公司);神经节苷脂（齐鲁制药有限公司）;羊抗兔IgG（北京中杉金桥生物技术有限公司）;SP免疫组化染色试剂盒（福州迈新公司）。(3)主要仪器电子分析天平;恒温水浴箱;电热恒温干燥箱;通用电泳仪;转印仪;低温冷冻离心机;-80度深低温冰箱;Motic Images Advanced3.2图象分析系统。2、实验方法:(1)参照Zea-Longa方法制作脑缺血再灌注损伤模型。(2)免疫组织化学方法检测各组大鼠海马ARMS与CrkL的表达。(3)Western blot方法检测各组大鼠海马ARMS与CrkL的表达。(4)图象分析Chemi Imager5500V2.03软件扫描Western blot结果后，应用Fluor Chen2.0软件结果进行定量分析。应用Motic Images Advanced3.2实时图象分析系统，对免疫组化结果进行拍照，光密度值分析。(5)统计学处理采用SPSS18.0统计软件进行数据分析，数据用均数±标准差表示，采用单因素方差分析进行组间比较，P＜0.05为差异有统计学意义。 结果:1、免疫组织化学方法检测ARMS与CrkL的表达。免疫组织化学方法检测发现，假手术组大鼠海马有微量ARMS与CrkL表达，而经过脑缺血再灌注处理后，ARMS与CrkL表达在6h已显著升高，在24h时达到峰值最高，3d时表达较假手术组仍显著升高(P＜0.05);与同一时间点的缺血再灌注组比较，GM1治疗组大鼠海马的ARMS与CrkL蛋白阳性表达亦显著升高(P＜0.05)。2、western blot方法检测ARMS与CrkL的表达。在应用Western blot方法检测各组大鼠海马ARMS与CrkL蛋白表达时发现，ARMS与CrkL在假手术组大鼠海马即有表达，缺血处理后，ARMS与CrkL的蛋白表达显著升高，在24h时，海马组织ARMS与CrkL的蛋白表达量最高，在3d时，ARMS与CrkL的蛋白表达量开始降低;与缺血再灌注组大鼠相比较，同一时间点的GM1治疗组大鼠海马ARMS蛋白与CrkL蛋白的阳性表达显著升高（P＜0.05）。 结论:GM1能够上调脑缺血再灌注损伤大鼠海马ARMS与CrkL的表达，提示GM1可能通过调节ARMS与CrkL的表达参与脑缺血再灌注后的神经保护作用。