本项研究是国家“863”中试项目“工程菌固定化细胞生产L—蛋氨酸技术”的部分基础研究工作。脱乙酰鸟氨酸酶是酶法生产L-蛋氨酸的关键酶。为了获得高效表达的脱乙酰鸟氨酸酶工程菌株，在工程菌技术改造及其固定化研究做了进一步的研究和探讨。我们采用基因工程技术，通过PCR技术扩增出了酰化酶关键酶基因—脱乙酰鸟氨酸酶基因ArgE，将其克隆到PUC19载体中，经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出重组阳性质粒，并测序鉴定，通过美国BLAST程序进行了基因数据库相似性比较分析。同时将其克隆于带有高效表达启动子FEV载体PXJ118上，构建成了重组载体PXJ128，并将其转化于受体菌中，成功构建了胞内表达的脱乙酰鸟氨酸酶大肠杆菌工程菌，其表达产物脱乙酰鸟氨酸酶酶活可达20000单位／克以上，同时我们对此工程菌酶学特性进行了研究，确定最佳酶作用条件及酶活影响因素。采用固定化细胞技术，使酶的利用率得以大幅度提高，固定化细胞酶活的半衰期达20天以上，可连续拆分使用生产24天，L-Met产率可达75％以上。 同时，为了促进所构建的大肠杆菌具有蔗糖利用能力，我们构建了含有大小为7.8KB的蔗糖水解酶基因sacC重组质粒，筛选得到含有两种基因的重组子，并转化大肠杆菌，使大肠杆菌获得蔗糖利用能力。