抗A族乙型溶血性链球菌卵黄抗体的制备及生物活性检测

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乙型溶血性链球菌为链球菌感染中的主要致病菌,可根据其细胞壁中特异性抗原(多糖体)的不同,分为A~H、K~T共18个族;又根据其表面蛋白质M、K、T、S抗原的不同,将各族细菌分为若干个血清型。对人类有致病力者90%为A族(Group Aβ-streptococcus hemolyticus),具有致病性强的特点,常引起人类和动物的多种疾病如皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。目前,A族乙型溶血性链球菌(Group Aβ-streptococcus hemolyticus)引发疾病多采用大环内酯类抗生素和β-内酰胺类抗生素进行治疗,但是在当前耐药菌不断增加的情况下,A族乙型溶血性链球菌的药物敏感性越来越得到关注,使得寻找一种安全、高效的抗生素替代品成为一个亟待解决的问题。特异性卵黄免疫球蛋白(Egg yolk immunoglobulin, IgY)可治疗由细菌或病毒引起的疾病,具有安全无残留、不产生抗药性、服用简便等优点,是一种具有广阔应用前景的抗生素替代品。本研究以用超声波破碎法制备的可溶性的A族乙型溶血性链球菌(Group Aβ-streptococcus hemolyticus)为抗原,免疫产卵母鸡获得特异性IgY; IgY经分离、纯化后,考马斯亮蓝G-250法测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度。间接ELISA测定抗体的效价。并用琼脂扩散,体外抑菌,免疫荧光等实验对特异性IgY在体外对A族乙型溶血性链球菌的生物活性进行了研究。结果显示提取的抗体含量平均10.8±0.87 mg/蛋,抗体纯度达92.5%。ELISA测定抗A族乙型溶血性链球菌鸡卵黄抗体的效价,于初免后40天左右达到最高值1:5120,并可持续30天。抗体在温度低于75℃、pH4-9具有良好的稳定性,抗体在pH为2和3时经过胃蛋白酶处理短时间内迅速失活,-20℃为其适宜贮藏温度,且反复冻融不影响其活性。免疫荧光结果显示,特异性IgY与A族乙型溶血性链球菌有较强的结合作用。体外抑菌实验结果显示当抗体浓度大于10 mg/mL,特异性IgY能显著抑制抗A族乙型溶血性链球菌的生长,随着抗体浓度的增加抑菌效果越明显,最低抑菌浓度为25 mg/mL。研究结果表明,实验得到的抗A族乙型溶血性链球菌IgY,产量、纯度、效价和特异性高,稳定性好,在体外能够特异性地与抗A族乙型溶血性链球菌结合。为特异性IgY在A族乙型溶血性链球菌引起的疾病的防治应用研究奠定了基础。
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