苯是重要的工业化学原料,广泛存在于生产环境与生活环境中,由于苯对人体有多种毒性,并已被确认为人类致癌物,因此监督和控制苯暴露尤其重要。苯大部分尿中代谢物和尿中原形苯被作为苯暴露的生物标志物而被广泛研究。短期苯暴露的生物标志物主要是苯尿中代谢物(暴露几小时后),包括苯酚、儿茶酚、氢醌、苯三酚、苯巯基尿酸和反反式粘糠酸;血蛋白加合物(暴露几天或几周后),包括氧化苯和血白蛋白内加合物苯醌。长期苯暴露(暴露数月或数年后)的生物标志物主要是染色体的改变。尿中苯巯基尿酸和反反式粘糠酸是短期苯暴露最好的生物标志物,这两种标志物在未接苯工人体内本底水平较低而在接苯工人体内水平上升幅度较大,其中,苯巯基尿酸在接苯,尤其是低浓度苯水平下,在体内变化幅度较大,更适合做苯尿中生物标志物。但苯巯基尿酸的测定对仪器要求较高,而反反式粘糠酸检测方法更易被基层接受、普及。尿中其他代谢物其本底值均高于苯巯基尿酸和反反式粘糠酸。接苯前后变化幅度较小,敏感性较差,不适合做低苯暴露时的生物标志物。结合本研究中心的实际情况和设备条件,对苯的生物标志物做一系列的研究与比较后,选择并研制我国职业接触苯尿中生物标志物之一,反-反式粘糠酸(ttMA)的生物限值并建立与此相配套的高效液相色谱(HPLC)测定尿中反-反式粘糠酸的方法。本课题选择武汉某钢铁公司共80人,身体健康,其中包括职业苯接触者56人和非苯接触者24人,应用活性炭吸附管采集工人呼吸带空气、二硫化碳洗脱、毛细管气相色谱法检测个体外暴露水平,同时采集当日工作班前和班末尿样本,应用HPLC测定尿中ttMA以评价内暴露水平。尿样经2mol/L盐酸酸化、香草酸为内标、乙酸乙酯萃取预处理,采用ODS C18柱、冰乙酸-四氢呋喃-甲醇-水(体积比1:2 :10:87)为流动相、流速0.9ml/min、紫外检验波长264nm、柱温25℃的色谱条件分离测定尿中ttMA。ttMA的线性范围为0.10-10.00mg/L,检出限为0.10mg/L,加标平均回收率为95.1%-100.5%,批内精密度、批间精密度变异系数分别为4.4%-7.5%和6.2%-8.8%。检测研究对象结果显示,接苯工人空气苯浓度范围0.332～146mg/m~3,平均浓度41.8mg/m~3,班末尿ttMA与个体苯接触量存在着良好线性关系Y(mg/gCr)=2.103+0.177X(mg/m~3),r = 0.791, P<0.01,将我国职业苯接触限值TWA=6 mg/m~3代入回归方程,推算工作班末尿中ttMA含量为3.165mg/g Cr。过去几十年里,人们在动物和人身上作了大量的研究,找出高暴露接苯水平下的敏感生物标志物。迄今为止,生物标志物可以衡量总体内摄取量、生物效应剂量或作为可行标记物。目前,低苯暴露对人类健康的影响主要是由高浓度推断到低浓度,或者由动物实验推导到人,这种推导具有不确定因素。并且这些生物标志物在低苯浓度下的应用性和前瞻性也没有完整的评估。人体内苯转化为反反式粘糠酸的代谢率约为2%,已经证明苯是反反式粘糠酸的主要来源,因此,反反式粘糠酸对苯而言比较特殊。此外,反反式粘糠酸是由反反式粘糠醛转化而来,而后者是苯的毒性代谢物,大量文献表明,尿中反反式粘糠酸和空气苯水平相关性好,且化学成分稳定,在苯浓度低至0.1ppm仍可作为可靠有效苯的生物标