膜蛋白表达和定位一直是国内外关注的难题,本文试图从信号肽这方面着手探讨此问题。本文研究的膜蛋白是存在于嗜碱菌膜上的一种小分子膜蛋白MrpF,属于嗜碱菌的Mrp Na+/H+反向载体膜蛋白系统的一个成员。关于信号肽的研究始于20世纪60年代,信号肽可引导胞内表达的蛋白转移至周质空间或胞外。信号肽包括三个区,即中间的疏水核心区(h区),C端的极性区(c区)和N端的强极性区(n区)。大肠杆菌中,由信号肽引导的蛋白质转运主要有两种方式：Sec途径和Tat途径,也有的蛋白质可以利用这两种方式转运。本文选取了Sec途径中的MalE和PhoA信号肽,Tat途径中的TorA信号肽,双途径中的FhuD信号肽,分别称为S1、S2、S3和S4,用于本课题研究。本文从表达载体构建、融合蛋白的诱导表达和带有PhoA标签的重组蛋白的酶活测定等方面展开研究。本文成功构建15种重组质粒。蛋白诱导表达显示,带有PhoA标签的重组蛋白中,S2和S3对膜蛋白MrpF定位的超表达有影响；带有MBP标签的重组蛋白中,S1对膜蛋白MrpF定位的超表达有影响；不带标签的重组蛋白中,S1和S3对不带标签的膜蛋白MrpF定位的超表达均有促进作用。全蛋白酶活检测显示,重组蛋白BL21/pCLE20、BL21/pCLE18和BL21/pCLE10的活性按倍数增加,重组蛋白BL21/pCLE12和BL21/pCLE16无活性。膜蛋白酶活检测显示,重组蛋白BL21/pCLE12、BL21/pCLE16和BL21/pCLE20活性很低。BL21/pCLE18膜蛋白相对酶活值是BL21/pCLE10膜蛋白相对酶活值的近四倍。BL21/pCLE10、BL21/pCLE12、BL21/pCLE16、 BL21/pCLE18和BL21/pCLE20分别表达重组蛋白S2-PhoA-MrpF、PhoA-MrpF、 S3-S4-PhoA-MrpF、S3-PhoA-MrpF和S4-PhoA-MrpF。总之,本文关于信号肽对膜蛋白定位的影响这一研究提供了有力的数据。